摘要：本研究采用高盐低p H值法提取多花黄精叶绿体DNA (cpDNA),并通过L9(33)正交试验,以缓冲液中的Na Cl浓度、叶片用量及去核离心力为考察因素,优化多花黄精cpDNA提取工艺,并设计核基因组及叶绿体基因组特异性引物,验证cpDNA质量。结果表明,当NaCl浓度为1.50 mol/L,叶片用量为10 g,去核离心力为600×g时,以提取的cpDNA为模板,进行PCR扩增,能扩增出叶绿体基因片段且没有扩增出核基因片段,表明提取的cpDNA没有核基因组污染,质量好,产率高,能满足后续基因扩增等实验要求,该条件为本研究的最佳条件。该方法简便快速,对实验仪器要求不高,成本低,能够为黄精属植物cpDNA的提取提供参考。

摘要：为了探究不同提取方法对葱属蔬菜作物叶绿体DNA提取效果的影响,首先以大葱叶片为实验材料,采用高盐低p H值法和蔗糖DNase法,对其进行叶绿体DNA提取测试。结果表明,高盐低ph法优于蔗糖DNase法,其DNA纯度相似,A260/A280值分别1.984和1.977;产率差异大,分别为0.482μg/g FW (fresh weight, FW)和0.059μg/g FW,高盐低ph值法是蔗糖DNase法产率的8.17倍。随后,利用叶绿体MatK、线粒体Atp6和核LFY基因设计引物,根据各组引物自身的扩增效率,以试剂盒提取的总DNA为对照,分别对三种细胞器DNA拷贝数的比值进行评估研究,高盐低ph法提取叶绿体DNA含量是试剂盒法的78.38倍,而蔗糖DNase法为15.51倍,高盐低ph法是蔗糖DNase法的5.05倍。高盐低ph法提取的叶绿体DNA产率和含量均优于蔗糖DNase法,同时在此基础建立了细胞器DNA含量定量分析方法。随后我们用高盐低ph法对葱属蔬菜作物的洋葱、大蒜和韭菜进行了测试,获得了预期的效果。该研究为今后葱属作物高效、高纯度、无污染的叶绿体DNA提取和葱属蔬菜作物细胞器全基因组测序提供依据。