摘要：目的:探讨小干扰RNA抑制高迁移率族蛋白b1(high mobility group box-1,HMGb1)表达后对p38MAPK通路的影响,从而了解HMGb1影响子宫内膜癌侵袭与转移的机制。方法:运用RNA干扰技术,设计合成4条HMGb1sh RNA,将HMGb1沉默效果最好的HMGb1 sh RNA转染子宫内膜癌HEC-1A细胞,通过RT-PCR和Western印迹技术检测转染后细胞HMGb1及p38MAPK在基因和蛋白水平的表达情况,MTT实验检测转染后细胞生长活力状态。结果:RTPCR和Western印迹结果均证实HMGb1 sh RNA载体成功抑制HMGb1和p38MAPK在HEC-1A细胞中m RNA和蛋白的表达(P<0.05);MTT结果显示HMGb1 sh RNA转染后HEC-1A细胞生长明显受抑(P<0.05)。结论:HMGb1表达下调可有效抑制子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖、侵袭和转移,此过程可能通过p38MAPK信号通路进行调节。

摘要：目的构建针对高迁移率族蛋白b1（HMGbl）基因的特异性RNA干扰载体，建立稳定转染该干扰载体的人脐静脉内皮细胞株（HUVEC）。方法根据HMGbl基因的编码序列及短发夹RNA（shRNA）设计原则，设计并合成针对HMGb1基因的特异性shRNA，将其定向克隆到pRNA—u6．1／Neo载体中，同时设立阴性对照，重组载体经脂质体转染HUVEC；转染细胞经类氨基糖抗生素样物质G418筛选，采用实时荧光逆转录-聚合酶链反应检测HMGb1mRNA表达，蛋白质免疫印迹法检测HMGb1蛋白表达。结果酶切鉴定和测序证实，重组质粒shRNA序列与设计的片段完全一致。HMGb1基因特异性RNA干扰载体能够显著抑制HMGbl在HUVEC细胞中的表达（mRNA：0．4635±0．0342比1．0340±0．0352，蛋白：0．4510±0．0200比1．0210±0．0110，均P〈0．05）。结论成功构建了靶向HMGb1基因的shRNA真核表达载体pRNA—HMGb1，并获得了稳定表达靶向HMGb1基因的shRNA的HUVEC细胞株，为进一步研究HMGb1在HUVEC细胞株中的生物学功能和作用机制奠定了基础。

摘要：目的 构建有效靶向小鼠高迁移率族蛋白b1 （HMGb1）基因的短发卡RNA（shRNA）载体.方法 针对小鼠HMGb1序列设计4条HMGb1干扰序列的shRNA载体：pYr-1.1-musHMGb1-sh1～4以及与哺乳动物基因组无同源性序列的shRNA作为对照（NC）组,Xho Ⅰ酶切鉴定其序列.然后利用质粒转染小鼠肝癌细胞株Hepal-6,实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测干扰效率.结果 经酶切凝胶电泳证实shRNA构建正确;质粒筛选结果表明,转染48h后,pYr-1.1-musHMGb1-sh1～4及NC组的荧光表达率为85％、78％、75％、70％、60％;FQ-PCR显示pYr-1.1-musHMGb1-sh1～4组及NC组转染Hepal-6细胞48h后相对表达量分别为0.52±0.05、0.59±0.08、0.61±0.08、0.57±0.21、1.02±0.21.结论 成功构建表达靶向HMGb1的4条shRNA重组质粒载体,其中pYr-1.1-musHMGb1-sh1质粒对HMGb1基因的抑制作用最强,为研究HMGb1的功能提供实验基础.

摘要：目的探讨慢性乙型肝炎(CHb)患者肝纤维化程度与血清高迁移率族蛋白b1(HMGb1)、CC修饰趋化因子11(CCL11)水平的关系。方法前瞻性纳入2018年6月至2019年9月郑州市第二人民医院收治92例CHb患者,入院时测定患者血清HMGb1、CCL11水平,设计基线资料调查表详细询问并记录患者一般资料,评估所有患者肝纤维化程度,分析血清HMGb1、CCL11水平与CHb患者纤维化程度的关系。结果92例CHb患者经病理诊断纤维化分期S1期30例,占比32.61%,S2期38例,占比41.30%,S3期24例,占比26.09%;S1期肝纤维化CHb患者的血清HMGb1、CCL11水平均低于S2、S3期肝纤维化患者(P0,P0,P0.80,预测价值均较理想,且以联合检测价值最佳。结论CHb患者血清HMGb1、CCL11水平的过表达可能与S2、S3期肝纤维化有关,可将HMGb1、CCL11作为CHb患者肝纤维化程度的辅助评估指标。

摘要：目的 探讨微小核糖核酸-34a(miR-34a)通过调节高迁移率族蛋白b1(HMGb1)对卵巢癌SKOV-3细胞增殖能力的影响,了解miR-34a参与卵巢癌发生、发展的分子机制。方法 设计miR-34a模拟物、miR-34a抑制剂,对SKOV-3细胞进行转染,采用CCK8检测转染24h、48h和72h后SKOV-3细胞存活情况,采用qRT-PCR法检测各组miR-34a和HMGb1mRNA的表达;利用Westernblot法检测各组HMGb1蛋白的表达。结果 转染miR-34a模拟物后,SKOV-3细胞的增殖率显著低于空白对照组和miR-34a模拟物对照组(P均<0.05),HMGb1mRNA和蛋白表达量较空白对照组和miR-34a模拟物对照组降低(P均<0.05);转染miR-34a抑制剂后,SKOV-3细胞的增殖率显著高于空白对照组和miR-34a抑制剂对照组(P均<0.05),HMGb1mRNA和蛋白表达量较空白对照组和miR-34a抑制剂对照组增加(P均<0.05)。结论 MiR-34a影响卵巢癌细胞的增殖功能,其可能是通过抑制HMGb1的表达参与卵巢癌的发生、发展。

摘要：目的观察乌司他丁对严重烧伤大鼠脾脏CD4＋T淋巴细胞和CD4＋CD25＋调节性T淋巴细胞（Treg）免疫功能及外周血高迁移率族蛋白b1（HMGb1）含量的影响，并分析其可能机制。方法将96只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为假伤组、单纯烧伤组和乌司他丁组，每组32只。假伤组大鼠背部浸入37℃温水中12S模拟致伤；单纯烧伤组、乌司他丁组大鼠背部浸入94℃热水中12S，造成30％TbSA Ⅲ度烫伤（以下称烧伤）。各组大鼠伤后即刻起腹腔注射生理盐水40mL／kg，乌司他丁组大鼠同时腹腔注射乌司他丁4×104U／kg，每隔12小时注射1次，持续至伤后72h。于伤后1、3、5、7d，每组各取8只大鼠采集腹主动脉血，采用ELISA法检测血清HMGb1含量，随即处死大鼠取脾脏组织，分选CD4＋CD25＋Treg和CD4＋T淋巴细胞。采用流式细胞仪检测CD4＋CD25＋Treg中细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）、叉头翼状螺旋转录因子p3（Foxp3）阳性表达率，采用ELISA法检测CD4＋CD25＋Treg培养上清液中IL-10含量；采用ELISA法检测CD4＋T淋巴细胞培养上清液中IL-2、IL-4和γ干扰素含量，采用酶标仪测定CD4＋T淋巴细胞增殖活性，各组各时相点样本数为8。对数据行析因设计方差分析和LSD检验。结果（1）与假伤组比较，单纯烧伤组大鼠伤后1～7d血清HMGb1含量明显增加（P值均小于0．01）。与单纯烧伤组比较，乌司他丁组大鼠伤后1～7d血清HMGb1含量明显减少（P值均小于0．01）。（2）与假伤组比较，单纯烧伤组大鼠伤后1～7d CD4＋CD25＋Treg中CTLA4、Foxp3阳性表达率及细胞培养上清液中IL-10含量明显升高或增加（P值均小于0．01），于伤后3d达最大值，分别为（65±10）％、（76±10）％、（28．2±4．4）pg／mL，此时假伤组大鼠该3项指标分别为（45±7）％、（46±7）％、（11．2±2．3）pg／mL。与单纯烧伤组比较，乌司他丁组大鼠伤后1～7d CD4＋ CD25＋Treg中CTLA4、Foxp3阳性表达率及细胞培养上清液中IL-10含量明显降低或减少（P〈0．05或P〈0．01），分别于伤后7、1、7d达最低值[（43±6）％、（50±8）％、（12．4±3．4）pg／mL]，此时单纯烧伤组大鼠该3项指标分别为（58±8）％、（71±9）％、（19．7±2．8）pg／mL。（3）与假伤组比较，单纯烧伤组大鼠伤后1～7d CD4＋T淋巴细胞培养上清液中IL-2和γ干扰素含量明显减少、IL4含量明显增加（P值均小于0．01）。与单纯烧伤组比较，乌司他丁组大鼠伤后1～7dCD4＋T淋巴细胞培养上清液中IL-2和1干扰索含量明显增加、IL-4含量明显减少（P〈0．05或P〈0．01）。（4）与假伤组比较，单纯烧伤组大鼠伤后1～7dCD4＋T淋巴细胞增殖活性明显减弱（P值均小于0．01）。与单纯烧伤组比较，乌司他丁组大鼠伤后1～7dCD4＋T淋巴细胞增殖活性明显增强（P值均小于0．01）。结论乌司他丁可减弱严重烧伤大鼠脾脏CD4＋CD25＋Treg介导的免疫抑制功能，改善脾脏CD4＋T淋巴细胞的分泌和增殖功能，原因可能为其抑制了体内HMGb1的大量释放。

摘要：目的探讨HMGb1在肺泡上皮细胞间质转分化中的作用。方法设计并合成针对HMGb1的小干扰RNA(siRNA),体外培养Ⅱ型肺泡上皮细胞系细胞-A549细胞,将细胞分为4组:1)对照组,2)TGF-β1刺激组,3)RNAi组(TGF-β1+HMGb1 siRNA),4)RNAi阴性对照组(TGF-β1+siRNA阴性对照);倒置相差显微镜观察细胞形态学;RT-PCR法检测HMGb1和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达;Western blot法检测α-SMA和HMGb1蛋白表达。结果 TGF-β1刺激组细胞HMGb1和α-SMA的mRNA和蛋白表达均较对照组显著增加(P<0.01);RNAi组HMGb1、α-SMA mRNA和蛋白表达均较正常对照组显著下降(P<0.01)。结论 HMGb1可能参与了TGFβ1诱导的肺泡上皮细胞转分化。

摘要：目的观察丹参酮ⅡA在小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型中的保护作用并初步探讨其减轻肝损伤的作用机制。方法C57bL/6小鼠经丹参酮ⅡA预处理1周后再建立缺血再灌注损伤模型,收集小鼠外周血清及肝脏组织检测小鼠肝功能(ALT和AST水平)、肝脏组织病理、肝细胞凋亡和炎症因子(肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-6)的变化,并检测肝组织中高迁移率族蛋白b1(HMGb1)、晚期糖基化终产物特异性受体(RAGE)和Toll样受体4(TLR4)蛋白表达的变化。结果所有数据经方差齐性检验,析因设计分析结果显示,丹参酮ⅡA能降低假手术小鼠ALT和AST水平(P<0.05),改善肝脏组织的病理改变(P<0.05)和使凋亡指数降低(P<0.05),减轻小鼠肝脏组织的炎性反应(P<0.05),使肝脏组织中HMGb1、TLR4和RAGE蛋白表达降低(P<0.05);缺血再灌注后,ALT和AST的水平均显著升高(P<0.05),肝脏组织的病理评分和凋亡指数显著升高(P<0.05),肝脏组织的炎性反应明显(P<0.05),肝脏组织中HMGb1、TLR4和RAGE的蛋白表达明显升高(P<0.05);丹参酮和缺血再灌注联合会拮抗(协同)影响肝功能、肝脏组织的病理评分、肝脏组织的炎性反应、细胞凋亡、抑制肝脏组织中HMGb1、TLR4和RAGE的蛋白表达(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA可减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤介导的脏脏组织损伤和炎症反应,其作用机制可能与下调肝脏组织中HMGb1、RAGE和TLR4蛋白表达有关。

摘要：目的:探讨高迁移率族蛋白b1(HMGb1)对血管瘤内皮细胞(HemECs)活力和凋亡的影响及机制。方法:分离培养人HemECs,将设计并合成的HMGb1小干扰RNA(HMGb1-siRNA)转染HemECs。CCK-8法检测各组细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)含量;Western blot检测HMGb1、NF-κb p65、p-Iκbα、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和survivin的蛋白表达。结果:与空白对照组比较,转染HMGb1-siRNA的HemECs中HMGb1的蛋白表达显著降低(P<0.05)。与NC组比较,转染HMGb1-siRNA的HemECs活力显著降低,凋亡率显著升高,ROS含量显著升高,NF-κb p65、p-Iκbα、cyclin D1和survivin的蛋白表达均显著降低(P<0.05);且与si-HMGb1组比较,HemECs中加入NF-κb信号通路抑制剂PDTC后,细胞活力抑制、凋亡率和ROS诱导及NF-κb p65、p-Iκbα、cyclin D1和survivin的蛋白表达下调更明显(P<0.05)。结论:抑制HMGb1表达可降低人HemECs活力和诱导凋亡,机制可能是通过提高ROS含量及下调NF-κb信号通路。

摘要：目的观察癫痫患者血清白细胞介素-1β(IL-1β)、高迁移率族蛋白b1(HMGb1)水平,并分析二者与患者脑电图异常的关系。方法选择2020年2月至2021年8月河南省南阳市第二人民医院收治的123例癫痫患者作为研究对象,全部患者均接受脑电图检查,依据患者脑电图Synek分级将患者分为5组;设计患者基线资料调查表,比较不同脑电图分级患者基线资料,重点分析血清IL-1β、HMGb1水平与癫痫患者脑电图异常的关系。结果123例癫痫患者中脑电图Synek分级Ⅰ级25例,Ⅱ级42例,Ⅲ级27例,Ⅳ级19例,Ⅴ级10例;脑电图Synek分级Ⅴ级患者癫痫发作持续时间及血清CRP、IL-1β、HMGb1水平最高,Ⅳ级、Ⅲ级、Ⅱ级逐渐降低,Ⅰ级最低,差异有统计学意义(P0,P<0.05);经有序回归分析结果显示,全面性癫痫发作脑电图Synek分级高的可能性是部分性发作的2.514倍;随着癫痫发作持续时间延长长、血清CRP、IL-1β、HMGb1水平升高,脑电图Synek分级高的可能性分别为1.113倍、1.241倍、2.333倍、1.533倍(P<0.05)。结论癫痫患者脑电图异常可能与血清IL-1β、HMGb1水平有关,且可能受二者水平的影响。