摘要：目的了解20株鲍氏不动杆菌(ABA)β-内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶编码基因、氯己定、磺胺耐药基因存在状况。方法对20株ABA进行了9种β-内酰胺酶基因、3种氨基糖苷类修饰酶基因和氯己定、磺胺耐药基因检测,以耐药基因为分子标记作检测结果的样本聚类进行菌株亲缘性分析。结果20株ABA中blaTEM阳性13株(65%)、blaADC阳性12株(60%)、blaSHV阳性1株(5%),其他β-内酰胺酶基因均阴性;20株ABA中氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅰ阳性12株(60%)、aac(6′)-Ⅰ阳性13株(65%)、ant(3″)-Ⅰ阳性14株(70%);14株检出qacE△1-sul1基因(70%),以耐药基因为分子标记作检测结果的样本聚类分析显示,其中9株为克隆传播。结论该20株菌β-内酰胺类、氨基糖苷类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶密切相关,并存在克隆传播。

摘要：目的 检测鲍氏不动杆菌的耐药表型及abaR基因并探讨该基因对鲍氏不动杆菌生物膜形成的影响。方法 2014年2—7月，从上海交通大学医学院附属瑞金医院临床微生物科收集到159株鲍氏不动杆菌，按收集顺序从1开始进行编号。（1）通过检测鲍氏不动杆菌16S核糖体DNA序列对上述159株鲍氏不动杆菌进行菌种鉴定，根据药物敏感试验结果挑选出泛耐药菌株和敏感菌株，记录其菌株数及其标本来源。（2）取鲍氏不动杆菌泛耐药菌株和敏感菌株，培养12、24、48、72 h，通过噻唑蓝法测定鲍氏不动杆菌生物膜形成情况（以吸光度值表示）。（3）通过美国国家生物技术信息中心基因数据库进行基因序列分析鲍氏不动杆菌ATCC 17978中abaR基因序列，并将其与嗜油不动杆菌DR1菌株的LuxR型受体AqsR基因序列进行比对。以鲍氏不动杆菌ATCC 17978 abaR为目的基因序列，PCR扩增87和96号鲍氏不动杆菌菌株并测序。将测序结果与鲍氏不动杆菌ATCC 17978 abaR基因序列进行比对。（4）取87号和96号鲍氏不动杆菌菌株，每株细菌均分为0.1%二甲基亚砜（DMSO）组、10 μmol/L N－庚酰－L－高丝氨酸内酯（C7－HSL）组、10 μmol/L N－（3－氢氧化十二酰基）－DL－高丝氨酸内酯（OH－dDHL）组、1%DMSO组、100 μmol/L C7－HSL组、100 μmol/L OH－dDHL组，每组3孔，分别用对应终体积分数的DMSO或对应终物质的量浓度的C7－HSL和OH－dDHL处理。通过噻唑蓝法检测培养12、X4、48 h，87号菌株和96号菌株的生物膜形式情况（以吸光度值表示）。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD检验及Bonferroni校正。结果 （1）共收集18株泛耐药菌株和5株敏感菌株，其中泛耐药菌株主要分布于本院急诊ICU、烧伤整形科，标本以痰液、血液及创面分泌物为主；敏感菌株来源分散，标本以痰液为主。（2）鲍氏不动杆菌泛耐药菌株培养各时相点吸光度值与敏感菌株相近（P值均大于0.05）。鲍氏不动杆菌泛耐药菌株培养24 h吸光度值均显著高于该类菌培养12、48、72 h（P值均小于0.01）；鲍氏不动杆菌敏感菌株培养24 h吸光度值显著高于该类菌培养12 h（P〈0.01）。（3）鲍氏不动杆菌中存在LuxR型受体abaR基因序列，与嗜油不动杆菌DR1菌株中的LuxR型受体AqsR相似度为87%。87号菌株及96号菌株中的abaR基因序列与鲍氏不动杆菌ATCC 17978的相似度分别为98%、99%。（4）87号菌株0.1%DMSO组培养各时相点吸光度值和1%DMSO组相近（P值均大于0.05）。96号菌株0.1%DMSO组培养12 h吸光度值显著低于1%DMSO组（P〈0.01），培养24 h吸光度值显著高于1%DMSO组（P〈0.01）。87号菌株及96号菌株10 μmol/L C7－HSL组培养24 h吸光度值均显著低于各自对应的0.1%DMSO组（P值均小于0.01）。87号菌株100 μmol/L C7－HSL组培养各时相点吸光度值与1%DMSO组相近（P值均大于0.05），96号菌株100 μmol/L C7－HSL组培养12 h吸光度值显著低于1%DMSO组（P〈0.01）。87号菌株和96号菌株10 μmol/L OH－dDHL组培养各时相点吸光度值与0.1%DMSO组相近（P值均大于0.05）。87号菌株100 μmol/L OH－dDHL组培养各时相点吸光度值与1%DMSO组相近（P值均大于0.05）。96号菌株100 μmol/L OH－dDHL组培养12 h吸光度值显著高于1%DMSO组（P〈0.01）。87号菌株及96号菌株0.1%DMSO组和1%DMSO组培养24 h吸光度值均显著高于培养12、48 h（P值均小于0.01）。结论 鲍氏不动杆菌泛耐药菌株普遍存在。鲍氏不动杆菌中存在abaR基因，与生物膜形成相关。

摘要：目的通过对比分析比阿培南联合用药对铜绿假单胞菌(PAE)和鲍氏不动杆菌(ABA)的药敏结果,探讨比阿培南在非发酵革兰阴性杆菌的最佳应用方法。方法常规培养分离PAE和ABA,K-B纸片法常规药敏,包括测定比阿培南联合舒巴坦、阿米卡星、环丙沙星和磷霉素联合药敏;采用棋盘法设计,测定上述联合对指定菌株的最低抑菌浓度(MIC),计算部分抑菌浓度(FIC)指数;测定指定ABA的比阿培南联合阿米卡星、舒巴坦的杀菌曲线。结果 33.3%PAE对比阿培南及阿米卡星不敏感,对舒巴坦不敏感率(耐药+中介/总数)达100.0%;ABA对比阿培南及阿米卡星的不敏感率达87.5%,对舒巴坦不敏感率为77.1%;PAE中,比阿培南与环丙沙星的协同率最低,与磷霉素的协同率最高;在ABA中,比阿培南与阿米卡星、环丙沙星均无协同作用,与舒巴坦的协同率最高;指定PAE及ABA各4株,经FIC指数测定,比阿培南与舒巴坦的协同作用均达100.0%;杀菌曲线再次提示比阿培南与舒巴坦联合为协同作用,但与阿米卡星联合为无关。结论比阿培南体外联合舒巴坦抗PAE及ABA的协同作用最常见,与阿米卡星或环丙沙星联合多表现为无关作用,与以往主要基于敏感菌的联合用药结论不同。

摘要：目的建立一种快速的多重聚合酶链反应(PCR)方法检测鲍氏不动杆菌D类碳青酶烯酶基因。方法根据blaOXA-51、blaOXA-23的保守区设计引物,建立检测D类碳青酶烯酶blaOXA-51、blaOXA-23基因的多重PCR方法。结果30株鲍氏不动杆菌中有24株同时扩出blaOXA-51和blaOXA-23,另外6株只扩出blaOXA-51条带。结论实验所建立的多重PCR能快速检测鲍氏不动杆菌D类碳青酶烯酶基因。

摘要：目的评价美罗培南(MER)与米诺环素(MIN)及头孢哌酮/舒巴坦(CFS),用临床分离的耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌(CRAB)的体外联合抗菌效应。方法采用棋盘法设计,微量肉汤稀释法测定,抗菌药物对60株临床分离的耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌的最低抑菌浓度(MIC),并计算抑菌指数(FIC)判断联合效应。结果美罗培南与头孢哌酮/舒巴坦联用后,FIC≤0.5的占28.3%、0.5～1的占53.4%、1～2的占18.3%、FIC>2的为0;美罗培南与米诺环素联用后,FIC≤0.5的占10.0%、0.5～1的占75.0%、1～2的占15.0%、FIC>2的为0;上述药物组合联用后,各药的MIC50与MIC90明显降低,浓度-累积抑菌百分率曲线左移。结论美罗培南与米诺环素及头孢哌酮/舒巴坦联用,对耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌体外联合抗菌效应主要表现为协同和相加作用。

摘要：目的探讨敲除abaR基因对鲍氏不动杆菌生长代谢和生物膜形成的影响。方法应用同源重组方法敲除鲍氏不动杆菌ATCC 17978(野生株)abaR基因,获得ATCC 17978abaR敲除株(ATCC 17978/ΔabaR::Kn),通过PCR电泳和测序验证。应用酶标仪测定鲍氏不动杆菌野生株和敲除株培养18 h内的生长曲线,同时应用结晶紫染色法分别于培养8、24、48 h,测定生物膜形成能力,结果均以吸光度值表示,每个时间点样本数为3。对数据进行析因设计方差分析、单因素方差分析、t检验、LSD检验。结果(1)打靶片段ΔabaR::Kn的PCR产物大小为3029 bp。ATCC 17978野生株成功敲除abaR基因后获得ATCC 17978敲除株(ATCC 17978/ΔabaR::Kn),敲除株PCR产物大小3300 bp,说明abaR基因被成功敲除。(2)培养2、3、4 h,鲍氏不动杆菌野生株吸光度值稍高于敲除株;培养5~18 h,鲍氏不动杆菌野生株和敲除株各时间点吸光度值相近。(3)培养8、24 h,鲍氏不动杆菌野生株生物膜形成能力(0.644±0.066、0.574±0.184)与敲除株(0.559±0.008、0.394±0.030)相近(t=2.209、1.167,P>0.05);培养48 h,鲍氏不动杆菌野生株生物膜形成能力(1.157±0.259)明显强于鲍氏不动杆菌敲除株(0.576±0.026,t=3.865,P<0.05)。鲍氏不动杆菌野生株培养48 h的生物膜形成能力明显强于培养8、24 h(P<0.05),鲍氏不动杆菌敲除株培养24 h的生物膜形成能力明显弱于培养8、48 h(P<0.05)。结论利用同源重组方案,可成功敲除鲍氏不动杆菌ATCC 17978 abaR基因,获得鲍氏不动杆菌敲除株ATCC 17978/ΔabaR::Kn。敲除abaR基因后,鲍氏不动杆菌自身的生长代谢不受影响,但其生物膜形成能力明显减弱。

摘要：目的评价舒巴坦/亚胺培南、舒巴坦/美罗培南、舒巴坦/米诺环素、舒巴坦/利福平对临床分离自呼吸道感染的105株耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌体外抗菌效应,为临床联合用药提供治疗依据。方法采用棋盘法设计,琼脂稀释法测定不同浓度组合的抗菌药物对105株临床分离的多药耐药鲍氏不动杆菌最低抑菌浓度(MIC),并计算部分抑菌浓度指数(FIC)判定联合效应。结果舒巴坦/亚胺培南、舒巴坦/美罗培南、舒巴坦/米诺环素、舒巴坦/利福平联用后,其MIC50和MIC90降低,联合效应主要表现为相加作用,无拮抗作用,与亚胺培南联用后,相加作用最高86.41%,其次是与美罗培南联用76.19%;部分菌株显示协同作用,其中与米诺环素联用协同作用最高20.19%,其次是与美罗培南联用17.14%。结论舒巴坦与亚胺培南或美罗培南或米诺环素或利福平联用后主要表现为协同和相加作用,对于严重的多药耐药鲍氏不动杆菌感染,可采用高剂量的舒巴坦联合治疗方案。

摘要：目的评价多黏菌素B与美罗培南联合用药,对110株临床分离的多药耐药的鲍氏不动杆菌的体外抗菌效应。方法采用棋盘法设计,琼脂稀释法测定不同浓度组合的抗菌药物,对110株临床分离的多药耐药鲍氏不动杆菌最低抑菌浓度(MIC),并计算FIC指数,判定联合效应;FIC≤0.5μg/ml为协同作用,0.5μg/ml2为拮抗作用。结果美罗培南与多黏菌素B联用后,其MIC50显著降低;部分抑菌指数(FIC)分布:FIC≤0.5μg/ml具有协同作用占92%;0.5μg/ml2μg/ml无关作用和拮抗作用为0。结论结果表明两药联用,对多药耐药的鲍氏不动杆菌表现为协同作用和相加作用,并以协同作用为主,无无关和拮抗作用。

摘要：目的评价舒巴坦与米诺环素联合使用,对临床分离多药耐药鲍氏不动杆菌的体外抗菌效应。方法棋盘法设计,采用琼脂稀释法测定不同浓度组合的抗菌药物对110株临床分离的多药耐药鲍氏不动杆菌的最低抑菌浓度(MIC),并计算部分抑菌浓度(FIC)指数,以判定抗菌药物联合使用的效应。结果舒巴坦与米诺环素联合使用后,MIC50显著降低,联合抗菌效应为:协同效应占22%,累加效应占74%,无关效应占5%,无拮抗效应。结论舒巴坦与米诺环素联合使用对多药耐药的鲍氏不动杆菌表现为协同和累加作用,并以累加作用为主,无关作用较少,无拮抗作用。

摘要：目的评价头孢哌酮/舒巴坦与米诺环素、头孢哌酮/舒巴坦与左氧氟沙星联合用药,对110株临床分离的多药耐药鲍氏不动杆菌的体外抗菌效应。方法采用棋盘法设计,琼脂稀释法测定不同浓度组合的抗菌药物对110株临床分离的多药耐药鲍氏不动杆菌最低抑菌浓度,并计算部分抑菌浓度(FIC)指数判定联合效应。结果头孢哌酮/舒巴坦与米诺环素联用后,其MIC50显著降低,FIC指数分布:FIC≤0.5占53%,0.52为0;头孢哌酮/舒巴坦与左氧氟沙星联用后,其MIC50显著降低,FIC指数分布:FIC≤0.5占59%,0.52为0。结论头孢哌酮/舒巴坦无论是与米诺环素还是与左氧氟沙星联用,对多药耐药的鲍氏不动杆菌表现为协同作用和相加作用,并以协同作用为主,无关作用较少,无拮抗作用。