摘要：目的:建立一种鳖甲配方颗粒特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法。方法:根据中华鳖Trionyx sinensis及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COXⅠ)基因序列,筛选出中华鳖的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,设计鳖甲鉴别专属引物BJ-5F及BJ-5R。通过优化PCR反应条件,确定最佳的PCR反应体系,并对该方法进行耐受性、适用性考察和测序验证。结果:当退火温度为60℃,循环33次时,鳖甲药材、标准汤剂冻干粉及配方颗粒均可在约236 bp处得到清晰单一的中华鳖条带,其混伪品及阴性对照品均无此条带。结论:该研究所建立的特异性PCR鉴别方法适用于快速鉴定鳖甲药材、标准汤剂冻干粉及配方颗粒的真伪,且具有专属性强、准确性高、简便易行等特点,为鳖甲配方颗粒质量标准的制定提供了参考依据。

摘要：目的 建立小儿肺咳颗粒中鳖甲DNA分子鉴定方法。方法 根据鳖和佛罗里达鳖线粒体全基因序列的差异设计特异性引物PP2和PA3,采用CTAB法、酚仿抽提法提取、纯化DNA,并进行特异性引物扩增和方法学考察,产物以2%琼脂糖凝胶电泳检测。结果 鳖及佛罗里达鳖的DNA经扩增后分别在183、95 bp处产生条带,且未观察到非特异性扩增条带,引物PP2及PA3对两者DNA的检测限分别为0.10、0.010 ng/μL。有4批小儿肺咳颗粒中检出鳖DNA,未检出佛罗里达鳖DNA;6批产品两者DNA均未能检出。结论 该方法方便、可靠地鉴定小儿肺咳颗粒中鳖甲,有助于控制含鳖甲成方制剂的质量。

摘要：目的对I-C-F-6的固相合成工艺进行系统研究。方法以树脂类型、缩合剂类型、反应时间和投料比为考察因素进行L 9(34)正交实验设计,以相对含量为考察指标,优选合成工艺,并进行工艺验证和工艺放大研究。结果确定合成I-C-F-6的最佳工艺:用Fmoc-Gly-Wang树脂,以6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯[O-(6-chloro-1-hydrocibenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphat,HCTU]N,N-二异丙基乙胺(N,N-diisopropylethylamine,DIPEA)为缩合剂,以1∶5为投料比反应2 h。以此工艺制备的I-C-F-6目标肽产率达77.03%,验证实验重复性好,5倍和25倍放大实验中目标肽的产率分别为62.86%和78.69%。结论建立的I-C-F-6合成工艺产率较高,重复性好,可为进一步的新药研究奠定基础。

摘要：鳖甲为鳖科动物鳖Tirionyx sinensis Wiegmann的背甲。其味咸，性微寒。具有滋阴潜阳，软坚散结，退热除蒸的功效。常用于阴虚发热，劳热骨蒸，虚风内动，经闭等症。其主要化学成分为氨基酸、蛋白质、动物胶、微量元素等。由于其有效成分煎出需要时间较长，在临床上常用其醋制品另煎人药。为了寻找鳖甲的最佳水提取工艺，本文以提取液中的含氮量为指标，采用正交试验设计法对其提取工艺进行优选。

摘要：鳖甲为临床常用的动物药材,炮制加工后鳖甲药材及饮片形态特征丢失,难以鉴别。为建立高效稳定的鳖甲DNA鉴别方法,该研究将SDS法与柱纯化相结合,使用通用引物进行PCR扩增和测序,并根据鳖甲及其混伪品序列差异,寻找特异性SNP位点设计了鉴别引物,对PCR反应条件进行优化,并进行适用性及准确性考察。当退火温度为62℃,循环次数为35,使用设计的鳖甲特异性鉴别引物Biejia-272.F/R进行PCR扩增,鳖甲药材、饮片及醋鳖甲均扩增获得约300 bp的特异性鉴别条带,混伪品无条带。该方法可作为一种快速准确鉴别鳖甲正伪品的鉴定方法。

摘要：目的确定鳖甲多糖的最佳提取工艺,以苯酚硫酸法测定鳖甲多糖含量。方法采用碱提法提取、醇沉得到鳖甲多糖;利用苯酚硫酸法显色,在490nm处测定吸光度。结果碱液浓度为8%、料液比为1∶25、提取温度为60℃、提取时间8h为最佳提取工艺,最佳醇沉浓度为80%;平均回收率为100.2%,RSD为1.4%(n=9)。结论本实验鳖甲多糖提取及含量测定操作简便、结果准确、重复性好,可用于鳖甲多糖的提取与含量测定。

摘要：目的基于特异性扩增建立动物药龟甲与鳖甲的真伪鉴定技术。方法根据龟甲与鳖甲及3种常见伪品的全基因组序列的差异设计了5对特异性引物(PCR、PTS、PMS、PPS、PAF),采用SDS法、酚仿抽提法从龟甲与鳖甲中提取与纯化DNA,并通过聚合酶链式反应(PCR)对目标片段进行扩增,产物以琼脂糖凝胶电泳分析及凝胶成像系统检测,并根据电泳条带的有无及分子量大小以鉴定真伪。结果龟甲与鳖甲及其常见伪品巴西龟、花龟、佛罗里达鳖的DNA经扩增后分别在120、120、81、105、114 bp处产生条带,且引物间无交叉反应,体现出很强的专属性,5个物种DNA的检出限为1 ng。自制药材、饮片、掺伪品均扩增出与目的片段相一致的条带。在市售样品中,18批龟甲和20批鳖甲经鉴定为正品,2批龟甲药材经鉴定为来源于巴西龟的伪品。结论本文所建立的技术可准确、快速地鉴定龟甲与鳖甲的真伪,有助于监控其产品质量。

摘要：目的:优选鳖甲的微波灭菌工艺。方法:以药材含湿率、灭菌时间、灭菌功率为考察因素,以灭菌率和鳖甲抗肝纤维化作用(人肝星状细胞LX-2生长抑制率)为评价指标,采用正交设计多指标综合评分法优化微波灭菌鳖甲的工艺参数。结果:最佳微波灭菌工艺参数:灭菌时间为6min,药材含湿率为20%,灭菌功率为4 000W。结论:正交设计多指标综合评分法可用于鳖甲微波灭菌工艺的参数优化,该方法简便可行,且灭菌效率高,对鳖甲抗肝纤维作用无影响。

摘要：目的:本文主要对鳖甲提取时的高压粉碎预处理进行了实验研究,着重探讨微波提取鳖甲的工艺最佳优化条件。方法:通过正交试验设计,以提取物中N含量为指标作为检测方法,按《中国药典》2010版测定方法进行N含量测定,从而研究鳖甲采用微波提取工艺的优化条件。结果:高压粉碎预处理后,提取效率显著增加,最佳提取工艺为微波功率600 W,原料粒度为80目,提取溶剂为水,液固比为8,提取时间25 min,提取2次。结论:微波提取鳖甲与传统提取方法相比,该方法不仅工艺简单,而且可以提高产率,缩短提取时间。

摘要：目的:优选醋炙鳖甲总氨基酸提取工艺。方法:以浸膏得率和总氨基酸含量为指标,对提取方法和提取溶剂进行优选,采用正交试验法考察该方法下提取鳖甲的溶剂用量、提取时间和提取次数,优化工艺条件。结果:以蒸馏水为溶剂进行回流法提取时,最佳提取工艺为10倍水煎煮2 h,提取3次。结论:以蒸馏水为溶剂进行回流提取时,浸膏得率和总氨基酸含量均较高,该方法设计合理、简便易行。