摘要：根据NCBI数据库中的黄曲霉细胞壁蛋白AFLMP1的基因序列设计特异引物,以黄曲霉菌总RNA逆转录获得的c DNA为模板,PCR扩增目的基因后分别克隆到p GEX-6p-1和p ET-22b原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。重组大肠杆菌经IPTG诱导表达后超声波破碎提取可溶性蛋白,SDS-PAGE电泳和Western杂交检测表达产物,结果表明GST-AFLMP1和AFLMP1-His融合蛋白能够在大肠杆菌中大量可溶性表达,可分别作为制备AFLMP1特异抗体的免疫抗原和筛选抗原。

摘要：利用与花生黄曲霉侵染抗性基因紧密连锁的AFLP标记“E45/M53-440”,经PAGE凝胶电泳后回收、克隆、测序,并根据测序结果设计PCR特异引物,通过对PCR条件的优化,成功地将AFLP标记“E45/M53-440”转化为实验结果稳定,操作更简单的SCAR标记“AFs-412”,标记与花生黄曲霉侵染抗性间的遗传距离为6.5cM。利用获得的SCAR标记对抗、感黄曲霉的花生种质资源进行了分子鉴定,结果表明标记与抗性鉴定结果具有较高的一致性,证实了该标记应用于研究群体之外的育种潜力。SCAR标记的建立为开展花生黄曲霉侵染抗性的标记辅助选择育种提供了简便实用的鉴定技术。

摘要：在Plackett-Burman试验设计结果基础上,采用Box-Behnken设计实验、响应曲面法(Responsesurfacemethodology,RSM)分析,对影响黄曲霉AS3.4408最适产黄曲霉毒素的关键培养条件温度、装液量和培养时间进行了探讨。结果表明,在培养温度为27～29℃、装液量为55～65mL、培养时间为7～10d条件下,每毫升发酵液可获得>500ng黄曲霉毒素;通过对毒素曲面方程和二次多项回归方程解逆矩阵得知在培养温度、装液量和时间分别为27℃、64.5mL和9d时,黄曲霉AS3.4408产黄曲霉毒素的最大预测值为606ng/mL发酵液,验证试验证实了该方程的预测值与实际值之间具有较好的拟合度。

摘要：黄曲霉的快速精确检测,既有利于预防真菌对粮食造成污染,也有利于控制粮食中真菌毒素的产生,确保粮食储藏安全。依据特异性邻甲基转移酶基因(OMT-1)设计了黄曲霉特异性引物,构建基于SYBR Green I实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)的检测体系,建立了黄曲霉毒素产生菌OMT-1基因拷贝数与循环阈值(cycle threshold,CT)之间的线性关系,对黄曲霉qPCR绝对定量方法进行验证。研究结果表明:该方法特异性强,检测灵敏度高,检测限为0.015μg/mL,OMT-1基因拷贝数的对数与CT线性相关,标准曲线方程为y=-3.5192x+55.905(R^(2)=0.9973),扩增效率为107.0%。OMT-1基因的拷贝数与同一组样本获取的菌落总数相关性高(R^(2)=0.97)。所建立的qPCR绝对定量方法可用于监测玉米中黄曲霉基因的表达。

摘要：研究比较成熟的可用于分析黄曲霉毒素生物合成相关基因的芯片分析技术。芯片点阵后依次通过温浴2h,650mJ/cm2紫外交联30s、80℃烘烤2h、预杂交45min、清洗、干燥等步骤,最后与待测样品在42℃杂交16h,可获得低背景高质量的芯片。本实验所用探针来源于寄生曲霉,而待测样品选择了黄曲霉菌株,芯片扫描结果显示荧光信号稳定,与反转录PCR扩增结果一致,并且无背景干扰。证明探针设计合理,实验方法可靠。初步建立了用芯片检测与黄曲霉毒素生物合成相关基因的技术平台。

摘要：采用气体二氧化氯作为抑菌防霉剂,通过平板涂布法评价其对黄曲霉的抑菌效果。对影响抑菌率的二氧化氯浓度和抑菌时间进行了单因素实验,并在此基础上以气体二氧化氯浓度,抑菌时间以及黄曲霉接种载体为实验因素,以抑菌率为指标,设计了4因素5水平的正交实验。实验结果表明:气体二氧化氯对谷物易染菌黄曲霉的抑菌效果显著。各因素的影响顺序分别为接种载体,抑菌时间,二氧化氯浓度。最佳工艺条件为:气体二氧化氯浓度为4.5mg/L,作用于苦荞表面40min时,杀菌率达到99.99%,同时,当抑菌时间为40min时,二氧化氯对负载于小麦和甜荞表面黄曲霉的抑菌率也均达到了90%以上,因此,气体二氧化氯作为新生食品抑菌防霉剂具有良好的研发和应用前景。

摘要：文章主要研究了纳豆菌对黄曲霉拮抗作用的试验方法,结果表明:(1)根据黄曲霉孢子和纳豆菌生长繁殖速度的差异,分别采用滤纸片法和点值法,将黄曲霉和纳豆菌接种时间设计为间隔0,24,48h,间隔24h,两者均出现明显的拮抗效果,说明2种方法均可行;(2)比较2种方法产生的抑菌圈大小,滤纸片法的抑菌圈大小平均为11.3mm,点值法的抑菌圈大小平均为11.0mm,两者之间没有明显差异;(3)从操作难易程度方面看,滤纸片法操作繁琐,重复性差,更需要丰富的实践经验和动手操作能力,而点值法简便易行,重复性和稳定性好,容易得到理想结果。

摘要：人工设计并合成了抗真菌多肽鲎素基因。将合成的鲎素基因首先克隆到ｐＵＣ１８载体上，利用通用引物测序，获得了与预期碱基序列完全一致的目的基因。再将鲎素基因转入大肠杆菌，诱导表达融合蛋白。３７℃下诱导表达的ＧＳＴ—鲎素融合蛋白完全不溶解，以包涵体的形式出现；而在３０℃诱导表达时，有少部分融合蛋白是可溶的。利用ｇｌｕ－ｔａｔｈｉｏｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ对可溶性的融合蛋白纯化后，纯化产物具有抑制黄曲霉孢子萌发的生物活性。

摘要：目的探讨黄曲霉(***)基因敲除体系的构建和RNA依赖的RNA聚合酶1(RDRP1)基因在***生长发育中的作用。方法通过National Center for Biotechnology Information网址查找RDRP1基因,设计上下游序列引物,引入融合片段20 bp,采用重叠PCR(overlap PCR)法融合RDRP1基因上下游片段和嘧啶磺胺抗性基因(ptrA);采用聚乙二醇(PEG)介导方法将该融合片段导入***的原生质体中获得RDRP1阳性转化子(ptrA抗性),采用Sourthern blot鉴定筛选RDRP1基因突变菌株;对RDRP1基因突变菌株,采用十字交叉法测定生长速率、血细胞计数板统计产孢量,手动计数Wickerham Medium(WKM)+尿嘧啶尿苷(UU)培养基上产生的菌核数量。结果获得ptrA抗性转化子13个;Sourthern blot鉴定4个为RDRP1基因缺失菌株,效率30.8%;与CA14相比,RDRP1基因突变菌株在表型、生长率、产孢量及菌核发育上差异无统计学意义(P>0.05)。结论overlap PCR结合PEG介导转化的方式可短时间内获得***基因敲除突变菌株,RDRP1基因不参与***表型、生长率、产孢量及菌核发育的调控作用。

摘要：黄曲霉Aspergillus flavus是一种广泛存在的致病真菌,早期准确检测黄曲霉并加以控制是减少黄曲霉毒素产生的有效措施。本研究利用真菌通用引物ITS1/ITS4扩增黄曲霉转录间隔区并进行克隆测序,通过序列比对,设计1对黄曲霉特异性引物S1/X2,由此建立的PCR检测体系对包括黄曲霉在内的5种曲霉菌及其他17种不同的真菌、细菌基因组DNA进行扩增,结果只有不同来源的黄曲霉菌株能扩增出334bp的特异性条带,而其余参试菌株均无扩增产物,其检测灵敏度在DNA水平上可达到280fg。该检测体系能从自然发病的花生或玉米组织中扩增到334bp的特异片段,实现对黄曲霉的快速可靠检测。