摘要：以香蕉花叶病病样为材料,初步建立了黄瓜花叶病毒核酸序列依赖性扩增(Nucleic acid sequence based amplifica-tion,NASBA)的检测技术。通过以香蕉叶片总RNA为模板,在黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)亚组ⅠRNA 2高保守区设计特异引物,进行NASBA反应,经5%琼脂糖凝胶电泳检测,阳性样品中出现了预期大小为310 bp的条带,而阴性和空白对照中均未出现。并对11份香蕉样品分别进行NASBA反应,并经过斑点杂交验证与RT-PCR检测比较,两者的检测结果一致,灵敏度相当,检出限量可达100 pg。

摘要：用除了卫星RNA和含有卫星RNA的CMV分离物在烟草和甜椒上进行了两组不同设计的温室实验。一组在不同保护接种后,在不同时间攻强毒CMV;另一组在不同保护接种后,在同一时间攻强毒CMV。攻毒后进行寄主症状调查、病情指数统计以及强毒CMV的A蛋白夹层ELISA测定,发现交叉保护和卫星RNA干扰作用在体內都存在,但其作用时间和程度不同。交叉保护在保护接种后10—15d以前明显,15d以后很弱;而卫星RNA干扰作用则很强,尤其在保护接种10d以后保护很完全,并且维持到30d以后。用凝胶电泳纯化与生物学单斑分离法相结合,获得了除去卫星RNA的CMV分离物。除去卫星RNA前后,CMV在不同寄主上引起的症状有很大变化,同时上述分离物在烟草上多次转接后在子代病毒中又发现卫星RNA。

摘要：以 CMV亚组 1株系 Fny- CMV RNA2基因组为模板 ,根据其序列设计引物进行 PCR扩增 ,得到 2 .5 kb的全长复制酶基因扩增产物 .对此产物进行纯化 ,并用 N co I和 Bsp HI进行双酶切 ,得到 3个片段 .将不含有 GDD保守区的 2个片段用 T4 DNA连接酶连接 ,并对连接产物进行 PCR扩增 ,得到 2 .2kb左右缺失 GDD保守区的黄瓜花叶病毒复制酶基因的扩增产物 .将其克隆到 p GEM- T Easy Vector上 ,进行序列测定 ,结果表明 GDD保守区确已缺失 .该缺失不导致开放阅读框架的移码 .将缺失 GDD保守区的基因定向克隆到植物表达载体 p BI12 1中 ,并经三亲交配导入根癌农杆菌中 ,经 PCR及酶切鉴定 。

摘要：在北京延庆的番茄上分离到1株黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)分离物CMV-YQ,该分离物在番茄上造成严重的蕨叶、矮化,在烟草上表现花叶、矮化和畸形,表现出很强的致病性。根据黄瓜花叶病毒外壳蛋白(coat protein,CP)基因的保守序列设计引物,利用RT-PCR技术对其CP基因片段进行了扩增并克隆,获得了含该基因全长657 bp的cDNA片段。序列测定与比较分析结果表明,北京地区造成番茄蕨叶的CMV分离物CP基因片段核酸序列与GenBank上CMV亚组Ⅰ其他分离物同源性高达90%～99%,属于CMV亚组Ⅰ。该分离物与分离于我国芭蕉的另一亚组Ⅰ分离物GB同源性为94.37%,两分离物之间存在寄主适应性变异。

摘要：【目的】建立检测香蕉中黄瓜花叶病毒Cucumber mosaic virus(CMV)的实时荧光定量方法.【方法】根据CMV外壳蛋白(CP)保守序列设计了TaqMan实时荧光定量PCR特异性探针及引物,优化反应体系检测TaqMan探针实时荧光定量方法的灵敏度、特异性和重复性.【结果和结论】该方法检测灵敏度为4.2×102μL-1,比普通PCR高100倍,且与香蕉束顶病毒Banana bunchy top virus(BBTV)、香蕉线条病毒Banana streak virus(BSV)无交叉反应,特异性和重复性都较好.用实时荧光定量PCR检测14份田间香蕉样品有5份样品为阳性,进一步证明建立的实时荧光定量方法可用于香蕉CMV的检测.

摘要：为了建立黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)可视化的反转录环介导等温扩增(Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测体系,根据CMV的外壳蛋白(coat protein,CP)基因核苷酸序列设计4条引物,优化了RT-LAMP反应体系中的d NTPs和Mg^(2+)浓度、反应温度和反应时间,同时对体系进行了特异性和灵敏性的测定。最终确定RT-LAMP的最优反应体系为d NTPs 1.2 mmol·L^(-1),Mg^(2+)6 mmol·L^(-1),在61℃的条件下反应40 min。该RT-LAMP体系比RT-PCR反应体系的灵敏度高100倍,并且反应产物可以通过将反应管快速离心后观察底部沉淀或通过加入SYBR GreenⅠ后的显色反应进行结果判定。该RT-LAMP检测体系可以对多种蔬菜的CMV进行高效快速的检测,操作简便,花费较小,十分适合生产上检测CMV使用。

摘要：黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒和马铃薯Y病毒是世界性分布的重要植物病毒,对农业生产危害较大。农作物感病多为复合侵染,症状表现较为复杂,急需建立快速、准确、能够一次检测多种病毒的检测方法。本研究根据3种病毒的外壳蛋白基因序列,设计引物和探针,制备基因芯片;用Cy3标记下游引物,RT-PCR扩增产物与芯片杂交,荧光扫描仪检测并分析信号。结果表明,该芯片可以从病毒侵染样本中检测到特异性识别信号,检测灵敏度比RT-PCR高10～100倍,该技术能对植物病毒做出快速、准确的检测。

摘要：早春西瓜是云南热区的特色水果,近年来病毒病发生危害日益严重。为明确侵染早春西瓜的主要病毒,本研究采集了云南省西双版纳州勐海县的早春西瓜植株与果实病毒病样品,应用透射电子显微镜制样观察、间接酶联免疫吸附测定(ID-ELISA)和RT-PCR扩增克隆与测序分析进行检测鉴定。结果表明:侵染早春西瓜的病毒为西瓜银色斑驳病毒(WSMoV)和黄瓜花叶病毒(CMV);ID-ELISA对叶部样品WSMoV和CMV的检出率分别为70%和20%,复合侵染率为15%,RT-PCR对这两种病毒的检出率分别为100%和65%,复合侵染率为65%;并且,实验对发病果实种子进行RT-PCR扩增克隆和测序分析发现上述2种病毒复合侵染率达100%;系统发育树分析表明,云南西瓜WSMoV分离株21YV-40(GenBank登录号:OP617563)、21YV-43(GenBank登录号:OP867047)与云南分离株Banna-2011(GenBank登录号:KM242056)相似性最高,达到99.00%,云南西瓜CMV分离株CMVYN40(GenBank登录号:OP617565)、CMVYN46(GenBank登录号:OP617566)与泰国分离株A27(GenBank登录号:FN552545)相似性最高,达到98.00%。本研究明确了勐海县早春西瓜主要受到WSMoV和CMV的侵染且存在复合侵染,首次发现WSMoV和CMV复合侵染西瓜发病果实种子,为早春西瓜病毒病的防控提供了依据。

摘要：黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)卫星RNA(satellite RNA,satRNA)通常影响CMV的致病性。本研究设计了检测satCMV的简并引物,通过RT-PCR从山东省泰安市3种自然发病寄主中检测到satCMV,发现了两类长度有明显差异的satCMV:白菜与萝卜中克隆的satCMV为339个核苷酸,二者的核苷酸一致率为99.41%;烟草中克隆的satCMV为383个核苷酸,与白菜和萝卜中satCMV的核苷酸序列一致率均为71.06%。系统进化分析表明这两类长度有明显差异的satCMV亲缘关系较远。两种类型的satCMV与CMV-Fny混合接种对CMV致病症状的调控存在明显差异。利用m Fold软件分析了两类不同长度的CMV卫星RNA基因组及其互补链的RNA结构特征,表明两类sat CMV与CMV互作的活跃度以及核心结构域存在差异。两类satCMV全基因组的克隆以及结构分析为研究不同类型satCMV与CMV的互作及其对CMV致病性的影响奠定了基础。

摘要：为了探索甜(辣)椒对黄瓜花叶病毒(CMV)抗性遗传性质及遗传方式,选用了5份对CMV具有抗感差异的甜(辣)椒品种(系),采用完全双列杂交设计,共25个组合(包括自交).在防虫网室内人工摩擦接种,调查病情指数,采用Hayman(1956)等的数量分析方法进行分析。结果表明,甜(辣)椒对CMV-PN的抗性遗传为不完全显性,符合“加性-显性”模式且加性更为重要,可以认为控制抗性的是一个显性基因组。因此在甜(辣)椒抗病育种时应采用“多重选择法”培育抗源材料。在选配一代杂种时,双亲应具有一定抗性。