摘要：本研究以“质量源于设计”(quality by design,QbD)理念为核心,优化氧化苦参碱-黄芪甲苷共载脂质体(oxymatrine-astragaloside IV liposomes,Om-As-Lip)的处方工艺并对其进行放大验证。采用乙醇注入联合pH梯度法制备Om-As-Lip,通过双重风险评估工具、Plackett-Burman设计和Box-Behnken响应面实验对其关键物料属性进行优化,建立设计空间;进一步考察Om-As-Lip的放大工艺,采用单因素试验优化高压匀质的关键工艺参数,并对其终产品进行质量评价。研究结果发现,黄芪甲苷药脂比、胆脂比和混合磷脂比例(氢化大豆卵磷脂∶大豆卵磷脂)是影响Om-As-Lip质量的关键材料属性,Box-Behnken设计建立的回归模型具有良好的预测性,并确定Om-As-Lip的最佳处方为:黄芪甲苷药脂比为1∶40,胆脂比为1∶10,氢化大豆卵磷脂∶大豆卵磷脂为51∶9。设计空间内的胆脂比可控制在1∶12~1∶5,氢化大豆卵磷脂∶大豆卵磷脂比例可控制在1∶7~17∶3。Om-As-Lip高压匀质的最佳压力为600 bar,循环次数为6次,温度为4℃。基于QbD理念制备的Om-As-Lip质量评价符合预期,建立的处方工艺稳定可行,有望为其今后的开发应用奠定实验基础。

摘要：目的 基于质量源于设计(QbD)理念优化黄芪甲苷PLGA纳米粒的处方配比及制备工艺。方法 采用乳化溶剂挥发法制备黄芪甲苷纳米粒。以黄芪甲苷纳米粒的包封率、载药量、粒径大小以及PDI计算总评归一值(OD值)为评价指标,首先应用Plackett-Burman实验设计筛选出对黄芪甲苷纳米粒性质影响显著的工艺变量,然后对筛选出的变量应用星点设计-效应面法进一步优化,并对其进行表征评价,考察纳米粒的体外释药行为。结果 基于Qb D理念,通过星点设计-效应面法对关键工艺参数(CPPs)进行优化,得到的最优处方总投药量为5.03 mg、泊洛沙姆浓度为0.48%、W/O体积比为14.33∶1。经验证黄芪甲苷纳米粒的包封率为(68.86±2.90)%,载药量为(4.78±0.45)%,粒径为(112.87±4.69)nm,PDI为0.134±0.010,ζ电位(-29.77±1.40)m V,且纳米粒呈圆球形,粒子均匀分散,未见粘连聚集,通过体外释放实验得知,纳米粒体外释药规律符合Riger-Peppas释药方程模型。结论 基于Qb D理念,得到了优化模型的产品,符合预期的QTPP质量稳定、可控,精度高,预测效果较好,制备工艺稳定可行。

摘要：目的优化黄芪甲苷的提取工艺并探讨研究其抗氧化性,为黄芪甲苷工业化制备及应用提供理论依据。方法通过单因素实验考察超声波、酶解、微波等3种前处理方法对黄芪甲苷提取率的影响,确定酶解作为黄芪甲苷提取的前处理方法。再将黄芪甲苷提取温度、提取时间、固液比及溶剂浓度进行单因素实验,在此基础上以黄芪甲苷的提取率作为评价指标进行正交试验设计。结果在乙醇浓度60%、料液比1∶20、浸提时间90 min,浸提温度60℃条件下,黄芪甲苷的提取率最高为0.49%。经抗氧化试验表明,黄芪甲苷对DPPH、羟自由基的清除效果显著,对超氧阴离子清除效果不显著。结论本研究优化了黄芪甲苷的制备工艺,同时其具有显著的清除DPPH、羟自由基的功能,能为黄芪功效成分的研究及天然抗氧化剂的开发提供理论依据。

摘要：目的优化黄芪甲苷二元醇质体处方,并对其理化性质进行考察。方法采用注入法制备黄芪甲苷二元醇质体。在单因素考察的基础上,以包封率(Y_(1))与平均粒径(Y_(2))为评价指标,将二者线性归一化,通过星点设计-响应面法优化黄芪甲苷二元醇质体处方,并考察二元醇质体的粒径、电位等理化性质。结果优选的处方为大豆卵磷脂含量3.86%,无水乙醇含量27.13%,丙二醇含量12.87%,水含量60%。在此条件下,黄芪甲苷二元醇质体的平均包封率为(86.28±0.03)%,平均粒径为(227.07±5.03)nm,Zeta电位为(-21.06±0.32)mV,PDI值为(0.172±0.016)。结论建立的星点设计-响应面法响应方程具有较好的预测性,可用于黄芪甲苷二元醇质体处方的优化,所得二元醇质体性质稳定。

摘要：目的探讨黄芪甲苷和人参皂苷Rg1配伍对PC12细胞氧糖剥夺后再复糖复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导的细胞自噬性损伤的影响及其相互作用。方法以PC12细胞建立OGD/R自噬性损伤模型,分别设立黄芪甲苷和人参皂苷Rg1不同剂量,药物干预细胞后,以激光共聚焦显微镜检测自噬体评价药物对细胞自噬性损伤的作用,并计算药物的半数抑制浓度(median inhibitory concentration,IC_(50))。以黄芪甲苷和人参皂苷Rg1的IC_(50)为1个剂量单位,按Isobologram法分别设立黄芪甲苷与人参皂苷Rg1不同比例(1∶2、1∶1、2∶1)的配伍,研究药物对细胞自噬的影响,计算各比例配伍的IC_(50),采用Isobologram及95%可信区间和相互作用指数γ分析黄芪甲苷与人参皂苷Rg1配伍抑制自噬的相互作用性质。在此基础上,以黄芪甲苷与人参皂苷Rg1的IC_(50)剂量进行1∶1配伍,以细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率、自噬体数量及p62蛋白表达评价药物配伍对细胞损伤和细胞自噬的影响。结果黄芪甲苷与人参皂苷Rg1抑制自噬的IC_(50)及其95%可信区间分别为(27.22±0.614)mg·L^(-1)[25.96,29.03]、(13.68±1.334)mg·L^(-1)[10.27,16.95]。黄芪甲苷与人参皂苷Rg1在1∶1配伍时呈现协同增效作用,而黄芪甲苷与人参皂苷Rg1在1∶2和2∶1配伍时,呈拮抗作用。以黄芪甲苷和人参皂苷Rg1的IC_(50)剂量进行1∶1配伍验证,结果显示单用黄芪甲苷和人参皂苷Rg1以及配伍均能增强细胞存活率,减轻LDH漏出,减少自噬体数量和LC3-Ⅱ蛋白数量,增加p62蛋白表达,且配伍组效应强于黄芪甲苷与人参皂苷Rg1单用组。析因设计实验分析表明,以黄芪甲苷和人参皂苷Rg1的IC_(50)剂量进行1∶1配伍时,对细胞存活、LDH漏出及自噬体形成均存在交互作用。结论在缺糖缺氧2h再复糖复氧24 h,细胞出现过度自噬和细胞损伤,黄芪甲苷和人参皂苷Rg1以IC_(50)剂量进行1∶1配伍时,对细胞自噬性损伤具有协同抑制作用。

摘要：目的制备黄芪甲苷(AST)纳米胶束(AST-NMs),并通过Caco-2单层细胞转运实验评价其渗透性。方法以聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物(Pluronic F127)和D-α-维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)作为载体材料,采用冷冻干燥-水化法制备AST-NMs,并以Pluronic F127与TPGS质量比(X_(1))和聚合物与药物质量比(X_(2))作为变量因素,以AST-NMs的包封率(Y_(1))和粒径分布(Y_(2))作为评价指标,使用中心复合实验设计优化并得到AST-NMs的最优处方;采用差示扫描量热法(DSC)和透射电镜对AST-NMs进行表征;研究了AST-NMs在4种释放介质中的稀释稳定性以及体外药物释放特性;通过Caco-2单层细胞转运实验比较了AST原料药与AST-NMs的渗透性。结果经优化得到AST-NMs的最优处方为:Pluronic F127与TPGS质量比为5∶1,聚合物与药物质量比为38∶1;DSC测定显示,AST-NMs中的药物吸热峰消失;在透射电镜下观察到AST-NMs呈球状分布,无聚集;AST-NMs经不同pH介质稀释后稳定性均较好,在4种释放介质中均表现为平稳的缓慢释药特征;AST-NMs在Caco-2单层细胞的渗透性显著高于AST原料药。结论将AST制备成AST-NMs,可显著提高药物渗透性,有望提高生物利用度。

摘要：为获得较高的黄芪甲苷提取效率,以黄芪药材为原料,通过方法学验证及正交试验对料液比、乙醇浓度、提取温度、提取时间4个关键提取工艺参数进行优化。结果表明:最佳工艺参数组合为料液比1∶16,乙醇浓度90%,提取温度80℃,提取时间120 min;该工艺条件下黄芪甲苷提取量为96.89 mg/4.0 g。这种工艺方法能为黄芪甲苷的提取和工业化生产提供理论参考和技术支持。

摘要：目的研究超高压提取黄芪药材中皂苷类成分的最佳工艺。方法以黄芪甲苷含量为指标,蒸发光散射检测器(ELSD)进行高效液相色谱检测,正交设计法对提取压力(100,300,500MPa),溶剂中乙醇浓度(50%,70%,90%),溶剂与原料比(10:1,15:1,20:1)以及提取时间(1,3,5min)等影响因素进行考察,确定最优提取条件,并同热回流提取作比较。结果超高压提取黄芪皂苷类成分的最佳工艺为:压力300MPa,溶剂乙醇体积分数70%,溶剂原料比20:1(mL.g-1),提取时间5min。超高压提取的效率优于热回流提取。结论同热回流方法比较,超高压提取黄芪中皂苷类成分,具有效率高、时间短和能耗低等优点。

摘要：目的:探讨氨试液水解法用于提高黄芪甲苷含量的最佳工艺条件;比较氨解前后黄芪总皂苷的含量差异。方法:采用正交设计试验对影响氨解程度的主要因素进行考察,以黄芪甲苷含量为指标,用高效液相色谱法测定其含量。采用大孔吸附树脂-比色法测定氨解前后黄芪总皂苷的含量。结果:浓氨试液与药材的配比对氨解程度的影响最为显著。最佳氨解工艺参数为:浓氨试液与药材配比1∶5,氨试液浓度为2%时,于90℃水浴回流2 h,黄芪甲苷含量较原药材提高约16倍。比色法结果显示氨解前后黄芪总皂苷含量无统计学差异。结论:氨解法可显著提高黄芪药材中黄芪甲苷的含量,且氨解过程并未影响黄芪总皂苷的含量。说明该法可使其他类型的皂苷转化为黄芪甲苷,具有较高实用价值,可为工业生产提供参考依据。

摘要：目的研究黄芪甲苷的心肌保护作用是否与内质网应激相关,并探讨其可能的线粒体信号转导机制。方法大鼠H9c2细胞常规培养;实验分为对照组、内质网应激诱导剂(2-DG)组、黄芪甲苷+2-DG组、黄芪甲苷组;共聚焦显微镜观察荧光强度变化以确定内质网应激对线粒体膜电位的影响,进而推测线粒体通透性转化孔(mPTP)开放情况;Western blot检测内质网应激相关GRP 78、GRP 94、IRE1的表达;电镜观察细胞超微结构。结果不同浓度2-DG能够模仿mPTP开放剂atractyloside使mPTP开放,以100μmol·L^(-1)2-DG作用最明显;黄芪甲苷明显抑制2-DG引起的mPTP开放;黄芪甲苷明显抑制2-DG引起的GPR 78、GRP 94、IRE1的表达;黄芪甲苷减轻2-DG引起的内质网和线粒体损伤。结论 2-DG可以诱发内质网应激反应,黄芪甲苷可能通过GRP 78、GRP 94、IRE1抑制内质网应激进而阻止mPTP开放,发挥心肌细胞线粒体保护作用。