摘要：蛤蚧为我国名贵动物中药材,为建立蛤蚧的LAMP可视化检测方法,实现其与混伪品的高效特异鉴别,该研究通过MEGA 6.0分析蛤蚧与其13种混伪品共65条12s rRNA序列,在线设计LAMP引物,并优化扩增条件,考察反应灵敏度,对蛤蚧及其混伪品进行鉴别验证。结果表明,基于12s rRNA序列的蛤蚧及其13种混伪品均可通过BLAsT比对准确区分。蛤蚧12s rRNA序列较为保守,10批次30条序列在引物设计区仅含2条单倍型和3个变异位点,成功设计了6条LAMP特异引物。64℃反应1 h,80℃灭活5 min,即可完成蛤蚧的可视化检测,最低检测浓度为5μg·L-1,高于传统PCR 2个数量级。该方法特异性强、灵敏度高、检测方便、反应时间短,且闭管操作,避免了污染,可实现蛤蚧与混伪品的快速可视化鉴别。

摘要：作为东南亚所特有的小型经济鱼类之一的太湖流域河川沙塘(Odontobutis potamophila)长期被归为河川沙塘鳢。为明确太湖流域河川沙塘鳢在沙塘鳢属中的分类地位,克隆测定了其线粒体12s和16s rRNA基因部分序列。在同源的658 bp长的12s rRNA基因序列中,有变异位点187个,简约信息位点133个;在同源的528 bp长的16srRNA基因同源序列中,有变异位点98个,简约信息位点45个。通过与其他沙塘鳢属鱼类的12s rRNA基因序列比较发现,太湖流域河川沙塘鳢与福建河川沙塘鳢的种内遗传距离为0.114,大于种内的遗传距离(0.00～0.024),且在16s rRNA基因序列分析中发现,太湖流域河川沙塘鳢与中国河川沙塘鳢的种内遗传距离为0.123,大于种内的遗传距离(0.00～0.016)。12s和16s rRNA系统发育分析也表明,太湖流域河川沙塘鳢有别于其他类别的沙塘鳢,且与已知的河川沙塘鳢存在分子遗传进化差异。

摘要：目的评价环介导等温扩增技术(LAMP)检测细粒棘球绦虫的敏感性。方法提取细粒棘球绦虫虫卵及成虫DNA,根据棘球绦虫线粒体12srRNA基因序列及LAMP法原理,设计4条细粒棘球绦虫特异性引物,进行LAMP反应,反应产物经sYBRGreenⅠ显色及1.5%琼脂糖电泳鉴定,同时设置泡状带绦虫及空白对照。用1000、100、10、1个虫卵/200μl细粒棘球绦虫虫卵DNA进行LAMP反应,评价其敏感性。结果细粒棘球绦虫检测管反应液呈混浊沉淀,显色后为绿色;对照组澄清,显色后为棕色。虫卵产物电泳后呈LAMP特征性梯状条带,对照组无扩增产物。LAMP可检测到的虫卵最低数量为1个。结论 LAMP法敏感、特异、简便,可用于棘球蚴病病原检测和疾病监测。

摘要：运用酚-氯仿方法提取12尾采集于云南省境内河口县的巨魾DNA,利用GenBank中鮡科种类设计特异性引物进行PCR扩增和克隆,利用DNAMAN软件进行序列比对以及采用软件MEGA 4.0来分析巨魾的碱基含量、遗传距离和系统进化树.结果显示:(1)得到954bp的12s rRNA基因序列和535bp的16s rRNA基因序列各12条;(2)12尾巨魾的12s rRNA基因、16s rRNA基因以及12s rRNA基因和16s rRNA的合并基因序列的相似性分别为99.89%,99.95%,99.89%;(3)12尾巨魾的12s rRNA,16s rRNA均表现出A+T碱基含量高于G+C碱基含量;(4)12尾巨魾的平均遗传距离为0.002,转换比颠换的平均值为3.065;(5)利用Neighbor-Joining(NJ)法构建的系统进化树表明魾属单独成一支,支持率达到99%,这一结果与传统的形态学分类基本相似.

摘要：2007年末，公司成功浇注了铸件重量为78t的立柱。立柱铸件轮廓尺寸为10040mm×3315mm×1930mm，腔内肋板厚30mm，材质HT350，浇注总重88t。控制材质化学成分w（％）为：2．9～3．0C，1．3～1．4si，1．0～1．1Mn，≤0．07P，≤0．12s，0．5～0．6Cu。导轨强度必须满足设计要求。

摘要：利用哺乳动物线粒体基因的保守序列设计引物,采用PCR方法,首次从亚洲黑熊四川亚种(Ursusthibetanus mupinensis)的肌肉组织总DNA中扩增出了线粒体12s rRNA和16s rRNA基因并进行了序列测定及分析.结果表明,四川黑熊12s rRNA基因长965 bp;16s rRNA基因长1 580 bp.通过进一步的序列分析表明,四川黑熊的12s rRNA和16s rRNA基因有较高的进化速率,与美洲黑熊、棕熊、北极熊、眼镜熊及大熊猫的相应基因相比较有较大差异,其中与美洲黑熊的同源性相对较高.

摘要：在提取黄牛肉、牦牛肉和水牛肉总DNA的基础上,设计通用引物进行PCR扩增,电泳回收PCR产物后双向测序,再通过构建系统进化树鉴别牛肉的物种来源。PCR扩增获得的牦牛、水牛12srDNA基因片段大小都为440bp,黄牛12srDNA基因片段大小都为439bp。参照引用的不同牛种12srDNA基因序列,构建的系统进化树能够清晰地鉴别测序样品的牛种来源。因此,结合运用PCR扩增和DNA测序技术是一种精确可靠的方法,能够有效地运用于牛肉的种源鉴别。

摘要：为了解决以往赛加羚羊(saiga tatarica)鉴别方法存在的不确定性或分辨率低的问题,在mtDNA的12s rRNA基因易变区设计了2对赛加羚羊特异性引物saiga A和saiga B,通过PCR扩增和常规电泳检测,分别得到127 bp和320 bp的片段,进而可通过这两个片段的有无来特异性检出赛加羚羊的DNA。引物saiga A和saiga B的最小检出量为1．0 ng DNA,稳定性和特异性好、灵敏度很高,可以应用于赛加羚羊样品的检测。

摘要：目的建立一种快速、特异、灵敏的猪源性成分检测方法。方法本研究以猪线粒体12s rRNA基因序列为靶位点设计引物和探针,进行荧光定量PCR扩增,建立猪源性成分检测方法;以常见畜禽肉包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、鸭肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种作特异性检测;以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液对猪肉DNA进行梯度稀释,做灵敏度检测。结果该方法能够有效对猪源性成分进行快速检测,具有较强的特异性,灵敏度较高(可达0.1μg/kg)并且羊肉成分的存在对猪肉灵敏度检测没有影响。结论该方法特异性强,灵敏度高,可以快速、准确检测畜肉食品中含有的猪源性成分。

摘要：建立起一种用于检测鹅肥肝是否掺假的方法:种属特异性PCR技术。以鹅、鸭的12srRNA基因序列设计特异引物,扩增目的片段分别为97bp和196bp。以三类温度处理和0.1%～100%的鸭肥肝掺假比例,分析方法的有效性和灵敏性。结果表明,这种方法的效果是不受样品被长时间加热的影响(高至100℃,10min);同时,即使当掺假比例只有0.1%时,仍能有效扩增出2特异条带。说明本方法适用于快速、准确地检测鹅肥肝掺假的需要。