摘要：TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1,TBK1)基因在天然抗菌免疫中发挥重要作用,为研究该基因在草鱼(Ctenopharyngodon idella)抗病天然免疫中的表达水平,本研究根据已报道的草鱼TBK1基因(ciTBK1)序列,设计特异性引物2对,基于ciTBK1和18s rrna双标准曲线建立了荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测方法。结果表明,建立的标准曲线Ct(Cycle thrshold)值与模板浓度的对数呈现良好的线性关系(R^(2)均大于0.99),建立的qRT-PCR检测方法能特异地定量检测ciTBK1基因,检测灵敏度可达50拷贝/μL,且组内及组间变异系数均小于5%。所建立的qRT-PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。

摘要：为建立一种特异、敏感、快速的牛卵形巴贝斯虫病诊断方法。根据GenBank已报道的牛卵形巴贝斯虫18s rrna基因(LC125457)设计合成了1对引物,通过条件优化,建立了牛卵形巴贝斯虫病二温式PCR诊断方法。该方法能扩增出464 bp的牛卵形巴贝斯虫特异性基因片段,测序结果与已知基因序列同源性为100%。对牛卵形巴贝斯虫基因组DNA的最小检测量为16 fg/μL,与牛瑟氏泰勒虫、牛巴贝斯虫和双芽巴贝斯虫均无交叉反应。二温式PCR诊断方法具有较高的特异性和敏感性,可用于牛卵形巴贝斯虫病的快速诊断和流行病学调查。

摘要：为筛选敏感、特异的住肉孢子虫(sarcocystis spp.)PCR检测方法,对以住肉孢子虫18s rrna、28s rrna和线粒体细胞色素C氧化酶I基因(cox 1)的部分片段为靶基因设计的3套引物建立的PCR方法进行敏感性和特异性试验,并对田间采集的100份牛源和猪源肌肉样品进行检测。结果显示,以18s rrna和28s rrna为靶基因的PCR检测方法的敏感性相似,DNA最小检出量均为1×10-2 ng/μL;而以cox 1为靶基因的PCR检测方法敏感性相对较低,DNA的最低检出量为1 ng/μL。对7种不同寄生虫DNA进行特异性试验,结果以cox 1基因为靶基因的PCR方法特异性较好,仅能够扩增出枯氏住肉孢子虫(sarcocystis cruzi)DNA;以18s rrna为靶基因的PCR法,除枯氏住肉孢子虫外,刚地弓形虫和微小隐孢子虫也有相似扩增条带;以28s rrna为靶基因的PCR法,除枯氏住肉孢子虫外,刚地弓形虫、微小隐孢子虫和欧猥迭宫绦虫DNA也能扩增出杂带,但大小不符。利用3种方法对100份牦牛和猪肉样品进行扩增,发现以18s rrna、28s rrna和cox 1为靶基因的PCR法的阳性率分别为36.00%(36/100)、43.00%(43/100)和38.00%(38/100)。结果表明,以cox 1为靶基因的PCR法有良好的特异性,适合用于田间动物肌肉样品中住肉孢子虫的检测,为开展动物住肉孢子虫病分子流行病学及防控研究提供了依据。

摘要：为了了解云南省独龙牛环孢子虫(Cyclospora)的分子流行病学情况,试验分四个季节从云南省怒江流域(鸠门当、古泉村、茨开镇、亚左洛村)和独龙江流域(独龙江乡)共五个地点采集1129份独龙牛粪便样本,根据环孢子虫的18s rrna基因序列设计引物进行巢式PCR扩增,以限制性内切酶BspEⅠ进行限制性片段长度多态性(RELP)分析。利用BLAsT工具对测得的序列与NCBI上已发表的环孢子虫18s rrna基因序列进行比对分析,通过生物学软件MEGA 6.0计算遗传距离并采用邻接法(NJ法)构建遗传进化树,以统计学软件sPss对感染率进行分析。结果表明:从1129份粪便样本中共检测出17份环孢子虫阳性样本,对测得序列进行同源性分析发现,5份样本与人环孢子虫亲缘关系较近(98.5%~99.4%),11份样本与广州牛源环孢子虫亲缘关系较近(94.4%~98.8%),1份样本与其他种类环孢子虫亲缘关系较远。独龙牛环孢子虫的总感染率为1.51%(17/1129),怒江流域和独龙江流域的感染率分别为1.00%(9/903)和3.54%(8/226),两者比较差异显著(P0.05)。说明云南省独龙牛存在环孢子虫感染,地点是独龙牛感染环孢子虫的影响因素,独龙江乡的感染风险较高,当地应做好防控工作。