摘要：本研究根据黄瓜花叶病毒2b基因的保守序列设计引物,利用一步RT-PCR技术对多个不同寄主和不同地理来源的黄瓜花叶病毒分离物的2b基因片段进行扩增,获得了含该基因全长约90％的cDNA片段(300bp)。序列测定与比较分析结果表明,国内不同CMV分离物2b基因片段核酸序列同源性达93％以上,推测的氨基酸序列同源性超过90％,且均属于亚组Ⅰ。

摘要：为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对口蹄疫病毒(FMDV)2b基因的抑制作用,针对WFL株FMDV的2b基因,设计了4个siRNA,并将shRNA表达模板插入pSilencer1.0-U6载体,构建shRNA表达质粒,将其与含绿色荧光蛋白报告基因的pEGFP+2b融合表达质粒瞬时共转染bHK-21细胞,以荧光显微镜和流式细胞仪检测荧光表达量的变化,以实时定量RT-PCR法检测对2b基因mRNA的抑制作用。结果表明,本试验所构建的针对2b基因的shRNA表达载体可以在bHK-21细胞中抑制2b基因的瞬时表达。

摘要：在已知基因序列但缺乏DNA模版的情况下,人工设计合成多条引物,采用重叠PCR技术体外人工合成编码青霉素结合蛋白的基因PbP 2b。将合成的PbP 2b基因连接到载体pet-30a上,并将重组表达载体(pet-30a)/PbP2b-tiger转入T7 expression ***表达菌株中。重组工程菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE鉴定,发现青霉素结合蛋白(PbPs)成功表达。本研究构建了高表达青霉素结合蛋白(PbPs)的原核表达系统,制备出青霉素结合蛋白,从而为进一步从基因水平认识青霉素结合蛋白(PbPs)奠定基础,为了解细菌耐药的机制提供依据。

摘要：从安徽亳州采集表现明显CMV症状的烟草样本,取ELISA检测阳性反应最强的样本提取总RNA。设计特异性引物扩增CMV RNA2部分片段,克隆并测序。其中包含的2b基因全长336个核苷酸,编码111个氨基酸。将来源于安徽烟草的CMV 2b基因与其它CMV 2b基因进行序列比对,结果表明,来源于安徽烟草的CMV2b基因与来源于韩国的2b基因AF033667的核苷酸序列相似性最高,达98.8%。构建2b基因系统关系树,也表明来源于安徽烟草的CMV 2b基因与AF033667亲缘关系最近。以安徽CMV 2b为模板,分别扩增大小约为300 bp的正向片段CMV 2b(r)和反向片段CMV 2b(i)。先后将反向片段CMV 2b(i)和正向片段CMV 2b(r)分别插入载体pSK-In所含intron两侧,获得重组质粒pSK-2b(r)-In-2b(i)。再将含intron的正反向片段插入pbIN438,最终得到含CMV 2b部分序列反向重复的植物表达载体pbIN-2b(r)-In-2b(i)。

摘要：目的 探讨EV71病毒2b基因对EV71病毒诱导细胞凋亡的影响.方法 设计、合成靶向EV71病毒2b基因的siRNA,PCR验证干扰效果,筛选最优siRNA浓度;易感非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)转染后接种EV71病毒,通过普通显微镜下细胞形态观察、细胞存活率测定、培养上清病毒滴度测定验证2b基因siRNA对病毒感染的抑制作用;通过流式细胞术检测细胞周期变化;通过Western blotting检测Caspase 3等凋亡蛋白,探讨凋亡通路上关键蛋白的改变.结果 靶向EV71病毒2b基因的siRNA在100 nM浓度下具有最优的基因沉默效果,EV71病毒感染前经转染处理的细胞存活率增高、上清病毒滴度降低、细胞周期阻滞减轻、凋亡蛋白Caspase 3激活减少(均P<0.05).结论 EV71病毒2b基因siRNA通过Caspase 3信号通路抑制病毒诱导的细胞凋亡.

摘要：根据已报道的绵羊种布鲁氏菌外膜蛋白基因omp2b的核酸序列设计引物,从新疆绵羊种布鲁氏菌基因组中扩增到了omp2b基因。将该片段克隆到PbS-T载体上,并对所得到的重组质粒进行酶切分析、PCR鉴定,证明所得到的片段为阳性重组子。与报道的绵羊种布鲁氏菌omp2b序列有89.72%的同源性,并在N端存在高度保守区。至此得到omp2b基因的全长克隆,通过对所克隆的基因和其他布鲁氏菌外膜蛋白omp2b的进化树分析,发现其和牛种布鲁氏菌的亲缘关系最近,同源性较高。