摘要：目的筛选靶向肠道病毒71型(EV71)基因组保守的5’非编码区(UTR)的有效小干扰RNA(siRNAs),确定有效靶点序列。方法设计合成靶向EV71基因组5’UTR的siRNAs;细胞毒性实验检测siRNAs对RD细胞的生存和生长的影响,显微镜观察siRNAs对EV71致细胞病变效应的影响,细胞生存实验、TaqMan实时定量RT-PCR实验筛选有效siRNAs。结果 siRNAs未影响RD细胞的生存及生长,对培养细胞无明显毒性。靶向EV71基因组5’UTR的si-1和si-2抗病毒效能最显著,能够延缓及减轻EV71感染致细胞病变效应,明显提高感染细胞的生存率,降低感染细胞中EV71 RNA的转录水平,且这种作用具有序列特异性。结论筛选出的靶向EV71基因组保守5’UTR的2个有效siRNA(ssi-1和si-2),对多株EV71中国流行株可能具有广谱抗病毒效能。

摘要：针对HCV基因组中较为保守的区域—5′UTR,设计一段GS引导序列,并与大肠杆菌RNase P的催化亚基—M1RNA的3′末端共价结合,构建序列特异性M1GS核酶—M1GS-HCV/C20。体外实验证实,所构建的人工核酶对HCV5′UTR具有明显的靶向切割活性,且这种切割发生于靶序列的特定位点。研究将为进一步阐明该核酶在胞内的活性、乃至动物模型内评价其抗病毒效果提供实验材料,从而为新型抗HCV药物及反义基因治疗的研究奠定基础。

摘要：目的克隆bax的 5’非编码区 (5’UTD) ,构建相关的表达载体。方法通过引物设计和条件优化 ,采用PCR方法克隆出目的基因 ,构建载体后利用酶切与测序进行鉴定。结果克隆基因产物酶切结果与理论预测值一致 ,测序未出现一个碱基突变。结论bax 5’UTD克隆成功 ,为进一步研究bax转录调控提供了载体资源。

摘要：目的:线粒体融合基因2(Mfn2)是一个与原发性高血压(EH)易感性相关的基因。本研究的目的是探讨该基因上游未编码区的单核苷酸位点变异与EH的相关性。方法:筛选健康正常血压(NT组)者342人和EH组患者366例。进行常规体检和血压、血脂及血糖等检查。提取静脉血DNA,设计引物进行PCR扩增后,进行测序。然后计算相关变异位点的等位基因和基因型在二组人群中分布的频率,并进一步分析其与EH的相关性。结果:SNPdb数据库检索表明A-35G是一个新的Mfn2启动子区的变异位点。该位点在NT组和EH组中基因型频率和基因频率均存在着明显的差别,即AA、AG、GG的频率分别为290(79.3%)/245(71.5%)、8(2.2%)/9(2.7%)、68(18.5%)/88(25.8%),A、G分别为588(80.1%)/499(73.0%)、144(19.7%)/185(27.0%)。进一步按性别分组后显示:在男性NT组和EH组中基因型频率和基因频率也存在着明显的差别,即AA、AG、GG的频率分别为157(79.3%)/143(73.2%)、4(1.9%)/3(1.7%)、40(20.0%)/49(25.1%),A、G分别为588(80.1%)/499(73.0%)、144(19.7%)/185(27.0%)。在女性NT组和EH组中基因型频率和基因频率不存在着明显的差别(P>0.05)。在经过年龄和性别调整后进行相关性分析发现A-35G、体质指数、身高和体重与EH发病明显相关。结论:A-35G是一个新的Mfn2启动子区的变异位点,基因频率和基因型频率在EH和男性EH组中明显高于正常对照组。相关性分析表明该变异也与EH的发病存在明显相关。因此,A-35G可能是EH发病的独立危险因素。