摘要：根据亲缘关系较近的几种作物acc氧化酶氨基酸序列,设计一对简并引物,从花椰菜(***)基因组中获得长1202bp的候选片段。序列分析表明该基因含有3个外显子(Exon)、2个内含子(Intron),编码区序列长756bp,编码252个氨基酸。同源性分析发现其与青花菜(***)上已发表mRNA序列同源率为99%(GenBank序列号:X81629),推断该基因为花椰菜acc氧化酶基因,命名为BoACO(GenBank登录号:AY676466)。在此基础上,用BP克隆的方法构建BoACO的RNA干涉(RNAi)载体pHBACO,对花椰菜进行遗传转化,获得卡那霉素抗性转化植株5棵,分子检测证实外源片段成功导入其中3棵花椰菜基因组中。Northern杂交分析显示:转基因植株内源ACO基因转录的mRNA被降解。acc氧化酶活性分析进一步表明,外源基因的导入大大地降低了acc氧化酶活性。

摘要：据已报道的香石竹氨基环丙烷羧酸(acc)氧化酶基因的cDNA序列设计特异引物,以香石竹品种“Master”基因组DNA为模板,用PCR方法克隆出香石竹ACO基因的部分序列。测序结果显示,克隆的序列与已报道序列基本一致。将克隆的香石竹ACO片段反向连接到植物表达载体pCAMBIA 1301中CaMV 35S启动子的下游,构建了香石竹ACO基因的反义表达载体pCAM-ACO2,为进一步通过反义技术延长转基因香石竹的花期奠定了基础。

摘要：利用在Genebank上已报道的香石竹acc氧化酶(ACO)基因的cDNA序列设计特异引物,以香石竹品种‘MASTER’的cDNA为模板进行PCR扩增,克隆香石竹acc氧化酶(ACO)基因。测序结果显示,克隆基因的序列与报道序列完全一致。将克隆的acc氧化酶(ACO)基因分别连接到植物表达载体PBI121启动子CaMV 35S的上游及下游,构建香石竹acc氧化酶(ACO)基因的正义表达载体PBI121-ACO及反义表达载体PBI121-anti ACO。经PCR鉴定,基因已成功构建到表达载体上。为香石竹抗衰老基因工程育种奠定了基础。

摘要：根据报道的牡丹acc氧化酶基因(DQ337251)cDNA序列,设计一对特异引物,以牡丹品种"洛阳红"基因组DNA为模板,用PCR扩增方法克隆出牡丹acc氧化酶基因的部分片段,并将其连接到pMD18-T载体上进行测序。结果表明,克隆的序列全长为467 bp,其中包括一个长度为157 bp的序列,推测它可能是一个内含子,其它序列与已报道序列同源性为98.2%;用SacⅠ和XbaⅠ对重组质粒和载体pBI 121酶切、连接,构建牡丹acc氧化酶基因的反义表达载体。

摘要：为构建诺丽ACO基因的超量表达及干涉表达载体,为后期对诺丽进行转基因操作,探究诺丽ACO基因的功能奠定基础。试验前期克隆了诺丽ACO基因的基础上,设计合成了ACO基因的超量表达及干涉表达的引物,采用PCR技术扩增出了目的基因,将扩增出的目的基因分别插入质粒Hellsgate8、Hellsgate2,转化大肠杆菌。结果表明:转化大肠杆菌并进行菌落PCR检测,筛选出结果较好的阳性克隆进行测序,测序后与诺丽ACO序列相比较,序列只有几个碱基的差别。取结果较好的超量表达及干涉表达载体质粒电转农杆菌,均能得到清晰而明亮的条带。本课题组利用前期克隆出的ACO基因,试验得到了诺丽ACO基因的超量表达及干涉表达载体质粒。

摘要：根据已有的决定黄瓜雌性的acc合酶基因CS-ACS1G,与黄瓜性型有关的acc氧化酶基因CS-ACO2、CS-ACO3,与黄瓜雌性相关的乙烯受体基因CS-ETR2和CS-ERS的序列,通过设计特异引物,对不同性型黄瓜品种基因组DNA进行扩增。结果表明,5个基因在本试验所用的不同性型黄瓜品种的基因组中均能被检测到,说明这5个性别决定相关基因在本试验中不具有雌性特异性。通过PCR克隆在全雌性黄瓜品种G5224中获得了长度为1124bp的acc合酶基因序列。BLAST分析表明,本试验所获得的acc合酶基因序列和Trebitsh公布的CS-ACS1G基因序列的同源程度为99%,表明PCR扩增产物确实为CS-ACS1G基因。此基因在基因组中表现不具雌性特异性的现象与多数研究者的结论相悖。