摘要：目的从肺脾肾不同组织水通道蛋白变化研究中医"水液代谢理论"的实验基础。方法通过2%腺嘌呤混悬液灌胃4周制备肾阳虚大鼠模型,并予肉苁蓉煎液进行干预6周,检测尿17羟皮质醇值含量、尿肌酐和尿渗透压,检测水通道蛋白1(aqp1)基因在肺、脾、肾的表达量的变化,及aqp1蛋白在各组织的表达情况。结果腺嘌呤模型大鼠尿17羟皮质醇值含量较正常组降低,符合肾阳虚,同时尿肌酐和尿渗透压降低。aqp1基因在腺嘌呤模型大鼠脾、肾组织的表达下调,肉苁蓉干预组aqp1基因在肺、肾组织的表达较模型组显著上调。aqp1蛋白在腺嘌呤模型组肺脾肾各组织中表达均增加,经肉苁蓉干预的大鼠肺肾组织中aqp1蛋白表达减少。结论肺、脾、肾均参与水液调节,aqp1是其分子基础之一,补益肾阳药物肉苁蓉有上调aqp1基因的作用,aqp1蛋白的表达还受到其他因子的调控。

摘要：目的应用RNA干扰技术,构建小鼠水通道蛋白1(aqp1)基因重组慢病毒载体并鉴定。方法对小鼠aqp1 mRNA分析,设计合成的单链引物经退火形成双链寡核苷酸序列,连接入经Age I和EcoR I双酶切线性化的pLKO.1-TRC慢病毒质粒载体中,菌液PCR鉴定并经测序验证。测序正确后与慢病毒包装辅助质粒共转染293T细胞,收集病毒上清经高速离心浓缩后感染小鼠小胶质细胞BV-2,Western blot法分析筛选有效shRNA序列。结果成功退火合成3对发夹shRNA序列并将其克隆到pLKO.1-TRC载体中,构建重组质粒pLKO-aqp1-SH1、2、3,经菌液PCR鉴定和测序验证载体构建成功。Real-time PCR检测发现重组质粒pLKO-aqp1-SH2感染BV-2细胞后aqp1 mRNA表达最低,Western blot结果进一步验证结果的准确性。结论成功构建出aqp1基因shRNA慢病毒载体。

摘要：目的:研究异丙酚治疗早期脓毒症时肺水通道蛋白1(aquaporin 1,aqp1)基因表达的差异和对TNF-α的影响。方法:按完全随机设计,分为正常组(N组),脂多糖组(L组),脂多糖+异丙酚组(LP组),每组20只(n=20)。每组再根据注射药物后1、2、4、8h的不同时间点,随机分为T1、T2、T4、T8亚组(n=5)。各组于相应时间点处死动物,留取肺标本,以RT-PCR及相关软件分析各组aqp1 mRNA表达;用ELISA法测血清TNF-α浓度。结果:脂多糖对肺aqp1 mRNA的表达有明显的抑制作用,尤其在注射1h后表达明显减少(P<0.05),2～8h逐渐上升,但仍低于对照组(P<0.05);异丙酚能使脓毒症大鼠aqp1基因上调(P<0.05),在早期(1h)差异有统计学意义(P<0.05)。血清TNF-α浓度,L组注射LPS后1hTNF-α血清水平骤然升高至峰值(P<0.05),至4h后渐趋平稳,但各时间点浓度水平均高于对照组(P<0.05),异丙酚治疗组各时间点TNF-α值较L组明显降低(P<0.05),于1h后渐升高,于4h达到峰值(P<0.05)。结论:注射LPS1h后可迅速下调肺组织aqp1基因的表达和使TNF-α血清水平骤然升高至峰值;异丙酚治疗脓毒症大鼠后,早期(1h后)肺组织aqp1mRNA表达明显上调,降低了TNF-α浓度。

摘要：研究目的XJ-6-A是我室与北京大学化学院合作，根据水通道蛋白1（Aquaporin1，aqp1）的空间结构和碳酸酐酶抑制剂（Carbonic Anhydrase Inhibitor，CAI）的化学结构，借助于计算机辅助药物设计合成的具有抑制肿瘤转移潜在活性的aqp1抑制剂。XJ-6-A在20mg／kg时具有明显的抑制肿瘤生长及转移作用。XJ-6-A在剂量为0．1μM和1μM时，能明显抑制细胞水转运功能。本研究旨在进一步证实XJ-6-A抑制肿瘤生长转移作用，探讨其可能的作用机制，以期发现具有抑制肿瘤生长转移作用的aqp1抑制剂。