摘要：目的构建芍药Paeonia lactiflora actin（Pl actin）基因原核表达载体,优化Pl actin基因在大肠杆菌中的高效表达体系。方法基于Pl actin基因c DNA序列及原核表达载体p ET-32a（＋）多克隆位点序列,设计一对5’末端分别插入Bam H I和Hind III酶切位点的特异性PCR引物,基于RT-PCR技术亚克隆Pl actin基因;用Bam H I和Hind III双酶切重组质粒p MD18-T-Pl actin和原核表达载体p ET-32a（＋）,胶回收纯化目的基因和空载体,连接、转化后应用菌落PCR、质粒PCR和双酶切鉴定出重组子p ET-32a（＋）-Pl actin,转化BL21（DE3）菌株获得基因表达工程菌;分别设置诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）浓度梯度、诱导的菌体起始密度梯度及表达时间梯度,诱导Pl actin基因在大肠杆菌中表达,SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝R250染色后制备干胶并比较重组actin蛋白的表达量。结果亚克隆测序结果表明Pl actin与目的序列完全一致,且其编码区序列（CDS）上下游成功插入了Bam H I和Hind III酶切位点;成功构建了芍药原核表达载体p ET-32a（＋）-Pl actin;诱导剂IPTG的最佳浓度为0.1 mmol/L,诱导的菌体起始密度（A600）为0.4~0.6,最佳表达时间为4 h。结论构建了Pl actin基因原核表达载体p ET-32a（＋）-Pl actin,建立了Pl actin基因在大肠杆菌中的高效表达体系。

摘要：根据已报道的其他植物肌动蛋白(actin,ACT)基因的保守序列设计一对简并性引物,以长穗偃麦草根中总RNA为模板,采用RT-PCR方法克隆出ACT基因,命名为EeACT。结果表明,该基因片段长度598 bp,编码198个氨基酸,与其他植物ACT氨基酸序列同源性较高,达90%以上。低温、盐及干旱处理12 h,EeACT在其地上部与根中的表达水平没有显著差异,说明EeACT表达稳定。

摘要：克隆木薯actin基因片段,为研究其他基因在木薯中的表达和调控提供内参基因。通过比较拟南芥、蓖麻和麻风树actin基因cDNA同源区域,根据基因的保守序列设计一对简并性引物,采用RT-PCR的方法扩增actin基因片段,使用分子生物学软件进行分析。结果显示,获得一段大小为698 bp的基因片段,编码233个氨基酸;该基因序列与其他actin基因核苷酸序列的同源性均在85%以上,氨基酸序列的同源性达94%以上;系统进化分析表明,木薯actin基因与大戟科植物橡胶、麻风树及蓖麻的亲缘关系最近,与毛果杨、陆地棉及木瓜等植物actin基因具有较高的保守性。克隆的基因片段为木薯actin基因片段,并命名为msACT。

摘要：actin作为一个看家基因,经常在实时定量PCR中被用作内参对不同样品中的m RNA进行定量,因此在基因表达分析中扮演重要的角色。利用同源克隆的方法,根据Gen Bank中已经公布的其他植物的actin基因的保守序列设计简并引物,采用RT-PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)技术从香樟中获得了4个c DNA片段。分子生物学分析软件分析结果显示,4个片段大小为均为998 bp,编码332个氨基酸;同源性分析表明,所获得的片段属于actin亚家族,分别命名为Cc ACTa、Cc ACTb、Cc ACTc和Cc ACTd并提交Gen Bank(登录号:KM086736、KM086737、KM086738和KM086739)。实时定量PCR结果显示,Cc ACTc在根、茎、叶及低温处理的叶片中表达量相对稳定,可以作为候选内参基因。

摘要：对琯溪蜜柚粒化与正常汁胞汁胞双向电泳分析,获得一个在粒化中上调表达的差异蛋白质点,经过质谱鉴定、生物信息学分析,为肌动蛋白(actin),以琯溪蜜柚粒化汁胞cDNA为模板,根据actin氨基酸序列设计引物,进行全长的扩增,得到actin开放阅读框包含1 134个碱基,编码377个氨基酸。其核酸序列与黑杨派(Populus trichocarpa)、棉花(Gossypium hirsutum)、蓖麻(Ricinus communis)、圆叶锦葵(Malva pusilla)ACT的同源性在89%以上。

摘要：本研究克隆了秋石斛‘三亚阳光’(Dendrobium ‘Sonia Hiasakul’)肌动蛋白基因(Denactin)cDNA全长序列,并进行了Denactin进化地位和表达模式的分析。通过克隆获得的Denactin cDNA序列的全长为1 596 bp,其中开放阅读框为1 134 bp,编码377个氨基酸,同时通过gDNA克隆获得了Denactin 3′端的一段包含一个内含子的403 bp的片段。序列同源性分析发现该基因序列与GenBank中注册的其他植物actin核苷酸序列的同源性均在85%以上,氨基酸序列的同源性高达97%以上。通过最大似然法构建其系统进化树,分析发现Denactin与黄石斛actin的亲缘关系最为密切,并与其他兰科植物归为一大类。半定量PCR分析表明,Denactin在幼苗叶片和中苗茎尖、根、叶片以及成熟植株的茎、根、叶片、花柄、1 mm花苞、3 mm花苞、5 mm花苞、9 mm花苞中均稳定表达。秋石斛Denactin的克隆和表达模式分析为秋石斛功能基因的表达分析提供了候选的内参基因,而3′端包含内含子的gDNA片段的克隆为避免实时定量分析中的gDNA污染提供了引物设计的便利。

摘要：对琯溪蜜柚粒化与正常汁胞双向电泳分析,获得一个在粒化中上调表达的差异蛋白质点,经过质谱鉴定、生物信息学分析,为肌动蛋白(actin),以琯溪蜜柚粒化汁胞cDNA为模板,根据actin氨基酸序列设计引物,进行全长的扩增,得到actin开放阅读框包含1134碱基,编码377氨基酸。其核酸序列与黑杨派(Populus trichocarpa)、棉花(Gossypium hirsutum)、蓖麻(Ricinus communis)、圆叶锦葵(Malva pusilla)ACT的同源性在89%以上。

摘要：为研究日本蛇根草功能基因的表达提供内参基因,笔者参照GenBank中桔梗的肌动蛋白基因(actin)序列设计引物,以日本蛇根草的cDNA为模板,通过RT-PCR方法成功克隆获得日本蛇根草actin基因片段,并将其命名为Ojactin(Ojactin片段长469 bp)。功能保守域分析显示Ojactin归属于actin超家族,与其他植物actin的氨基酸序列同源性达94%以上;系统进化树分析显示,Ojactin与咖啡的亲缘关系最近。

摘要：本研究旨在建立一种以白纹伊蚊actin基因表达量作为参照的登革Ⅱ型病毒一步法实时荧光定量PCR检测技术,为登革病毒在蚊虫中的定量检测提供更准确的检测方法。根据登革Ⅱ型病毒和白纹伊蚊actin基因保守区序列设计引物和探针,在检测体系中同时加入病毒和actin基因的特异性引物,计算每个样本中病毒含量与actin表达量的比值,得到更为准确的定量结果。该方法重复性好、灵敏度高,可用于实验室白纹伊蚊感染登革Ⅱ型病毒的病毒载量检测。

摘要：[Objective] To clone the actin gene of Cryptosporidium andersoni, and to study its eukaryotic expression in Hela cells. [Methed] Specific primers were designed for the partial encoding sequence of actin, which were obtained by screening the T7 phage display library of Cryptosporidium andersoni, and the actin gene CA42 was amplified by PCR. Recombinant eukaryotic expression plasmid pVAX1-CA42 was constructed and transfected to Hela cells with lipofection strategy. Indirect im- munofluorescence staining, SDS-PAGE and Western blotting analysis were used to detect the expression of recombinant protein in Hela cells. [Result] CA42 protein was successfully expressed in Hela cells, and the expression products had reactogenicity. [Conclusion] The partial encoding sequence of actin from Cryptosporidium andersoni has been successfully cloned, and it can be stably expressed in Hela Cells