摘要：目的 应用affymetrix全基因组芯片结合荧光定量PCR（quantitative real-timePCR，qPCR）技术，进行致病性DNA拷贝数变异的精细定位研究。方法以一个定位于染色体7q36的中国人遗传性三节拇指多并指综合征伴随Ⅳ型并指家系中的一例患者为研究对象。收集外周血标本，常规提取基因组DNA。应用affymetrix Genome-Wide Human SNP Array6．0芯片，将基因组DNA纯化，经过酶切、连接、扩增、标记、杂交、染色和扫描等步骤后得到原始数据，应用affymetrix Genotyping Console3．0软件进行拷贝数分析。在经芯片分析所确定的重复范围内设计引物，采用qPCR方法进行验证，并进一步缩小断端范周、精确重复区域范围。结果将患者重复区域两断端范围由原来的113kb和33kb分别缩小到5．4kb和1．8kb，致病性DNA重复范围由原来的291～437kb精确至379～387kb。结论应用affymetrix全基因组芯片联合qPCR技术可以实现对DNA拷贝数突变的精确、可靠的检测。

摘要：目的探索骨肉瘤发病相关基因,研究基因表达水平对于骨肉瘤发病的重要意义。方法采用3个公认的骨肉瘤细胞株及1个成骨细胞株,提取总RNA,合成生物素标记的cRNA与affymetrixGeneChipU133A芯片杂交。随机挑选10个差异表达基因,分别设计合成引物,用嵌合荧光法(SYBRGreenI)实时RTPCR法定量测量9例术中收集的新鲜骨肉瘤标本中各基因的表达水平,应用ABIPrism7000分析其与成骨细胞株之间的表达差异。结果以表达差异≥2.0倍为限,在affymetrixHGU133A芯片包含的所有基因(约22000个转录本)中,3个骨肉瘤细胞株与成骨细胞株相比较,共同上调58个基因;共同下调142个基因。随机挑选10个差异表达基因的实时RTPCR结果与芯片结果完全相符。结论骨肉瘤是一种多基因病变,应用微矩列有助于发现该肿瘤的基因变化规律以及研究肿瘤内基因与基因的相互作用关系。