摘要：aiia蛋白通过破坏病原菌的信号分子来阻断病原菌的群体感应调节系统,达到抗病的目的,是一种新型的抗病蛋白.根据蜡状芽胞杆菌ATCC14579基因组中aiia序列设计引物,从苏云金芽胞杆菌中成功扩增出aiia基因,其ORF为753bp,测序后经blast检测与已发表的序列相似性均在95%以上.将此基因克隆到pET28a表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,超量表达的蛋白在菌体中以包涵体形式存在,纯化的aiia蛋白经SDS PAGE电泳检测,表达产物分子量为28×103,致病性测定表明该蛋白对魔芋软腐病菌CZY具有较强的抗病活性.

摘要：aiia蛋白能够专一性地水解革兰氏阴性菌分泌的信号分子,从而抑制其致病基因的表达,减弱致病性。根据NCBI上公布的蜡状芽胞杆菌ATCC14579的aiia序列设计引物,从苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis NBIN-861中扩增得到aiia基因(GenBank登录号:MG704113),全长基因约750 bp。将aiia基因插入大肠杆菌表达载体pET-28a和芽胞杆菌表达载体pBMB1A中,构建重组表达载体pETaiia和pBMaiia,pETaiia转化大肠杆菌BL21(DE3),pBMaiia转化多黏类芽胞杆菌NR1,获得重组工程菌BLaiia和BPaiia。SDS-PAGE和蛋白质谱鉴定表明aiia蛋白均成功表达,利用指示菌紫色杆菌CV026检测发现目的蛋白具有水解N-酰基高丝氨酸内酯活性。其中纯化的aiia蛋白(1.13 mg/mL)和重组菌BPaiia浓缩的发酵上清液中的aiia蛋白活性较高(透明圈直径分别为16和18 mm),马铃薯致病性试验和抑菌试验结果表明该蛋白对胡萝卜欧文氏菌具有一定的抗病活性,但不具有抑菌活性。多黏芽胞杆菌NR1和重组菌BPaiia发酵产生的抑菌物质含量均为1.2%～1.3%,具有良好的抑菌效果。本研究为构建更有效的生物防治菌株奠定了理论基础。

摘要：根据NCBI上已公布的枯草芽孢杆菌BS168菌株的β-1,4-glucanase(eglS)基因以及苏云金芽孢杆菌的aiia基因序列,设计引物并扩增得到eglS基因的启动子、信号肽序列和aiia基因.构建重组表达载体Ps4-eaiia,转化枯草芽孢杆菌BS168,得到枯草芽孢杆菌工程菌BS168/Ps4-eaiia.该工程菌诱导发酵后经SDS-PAGE和Western blotting分析表明:aiia基因实现了在枯草芽孢杆菌中的表达.对胡萝卜软腐欧文氏菌进行马铃薯的抗病性实验,结果表明aiia基因在枯草芽孢杆菌中表达的aiia蛋白对胡萝卜欧文氏杆菌表现出一定的抗病性.