摘要：构建大菜粉蝶Lipocalin蛋白家族中的BBP蛋白突变文库,依据基因序列,分别设计10条和12条引物,通过PCR重叠延伸法得到包含随机突变蛋白BBP的基因序列,并重组到噬菌粒载体pCANTAB5E中构建Lipocalin突变文库,库容达到4.0×109.以偶联分子BSA-克百威和OVA-克百威为靶分子,采用柱式和平皿式交叉法对Lipocalin文库进行了筛选,用竞争洗脱法洗脱特异结合活性的噬菌体.经过3轮筛选,从第3轮的洗脱液中随机挑选了10个重组克隆,用Dot-blotting法检测出K7anticalin分子能与克百威特异结合.为研发克百威的anticalin类检测试剂盒提供了候选分子,也为拓宽Lipocalin文库在有害小分子检测方面的应用奠定了基础.

摘要：根据Lipocalin蛋白家族的基因序列设计引物,通过PCR重叠延伸得到含随机突变蛋白的基因序列,重组到噬菌粒载体构建随机突变Lipocalin文库。以NSF60细胞对Lipocalin文库进行差减筛选,再用肥大细胞进行亲和筛选,得到结合肥大细胞的Lipocalin次级文库。以FcεRI-α受体蛋白为靶分子对Lipocalin次级文库进行富集筛选,洗脱特异性结合的噬菌体。经过3轮筛选,从第3轮的洗脱克隆中随机挑取8个重组噬菌体克隆。ELISA法检测出3个anticalins分子能与肥大细胞FcεRI-α受体特异性结合。这为研发肥大细胞FcεRI-α受体阻断药物提供了生物类候选分子,也为Ig E相关的变态反应疾病的生物类小分子药物研发奠定了基础。