摘要：为探讨人类ERMAP基因在红细胞分化发育过程中的作用,本研究设计ERMAP-dsDNA,制备ERMAP-shRNA表达质粒,并建立稳定表达ERMAP-shRNA的K562细胞系(即ERMAP-shRNA/K562细胞系),观察ara-c诱导ERMAP-shRNA/K562细胞向红细胞系分化过程中,细胞形态、联苯胺染色细胞阳性率和细胞表面标记等的变化,同时以FQ-PcR检测K562细胞人类ERMAP基因表达量的变化。结果发现:经ara-c诱导72小时,ERMAP-shRNA/K562细胞与对照组比较,体积较大,胞浆量较少,着色大部分呈深蓝色或蓝紫色,部分细胞仍可见1-2个核仁;联苯胺染色阳性率由1.17%增加至2.04%(p<0.05),但仍低于ara-c诱导K562组(p<0.05);cD36-/cD235a+细胞比例从8.83%增至11.28%,cD36+/cD235a+细胞比例从1.23%增至2.64%,cD36+/cD235a-细胞比例从0.59%增至1.47%,均明显低于ara-c诱导K562细胞组;与此同时,ERMAP-shRNA/K562细胞ERMAP基因的表达量从诱导前的2.52×10-3缓慢增加至诱导72小时后的4.53×10-3,明显低于K562细胞组。结论:ERMAP-shRNA可抑制ara-c诱导K562细胞向红系分化的过程,这进一步提示人类ERMAP基因与红细胞分化发育过程有关。

摘要：目的:研究hes家族bHLH转录因子4(HES4)与急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞系Jurkat对化疗药物阿糖胞苷(ara-c)的敏感性作用。方法:构建Lenti-pcDH-HES4-puro质粒,包装慢病毒感染Jurkat细胞,感染空载体Lenti-pcDH-puro为对照组,puromycin筛选阳性细胞,Realtime-PcR检测转录水平HES4过表达情况,ccK8法检测Jurkat对ara-c敏感性,ara-c终浓度为0.1、1、10、100、1000、10000 nmol·L^(-1);设计3对针对于HES4的特异sgRNA序列,构建LentiGuide-sgRNA1-puro、LentiGuide-sgRNA2-Puro、LentiGuide-sgRNA3-puro质粒,LentiGuide-puro空载体为对照组,包装慢病毒感染Jurkat细胞,puromycin筛选,提取基因组DNA,PcR扩增sgRNA的靶序列,一代测序检测HES4的敲除效率,ccK8法检测敲除HES4后Jurkat对ara-c敏感性,ara-c终浓度为0.1、1、10、100、1000、10000 nmol·L^(-1)。结果:与对照组相比,HES4在Jurkat中过表达(2.37±0.09)倍(P0.05)。结论:HES4抑制T-ALL细胞系Jurkat对ara-c的敏感性,为T-ALL化疗耐受的机制研究提供指导。