摘要：目的构建bcsc-1基因慢病毒RNA干扰载体并感染人乳腺癌细胞MCF-7,实时荧光定量PCR(QPCR)检测干扰效果。方法 设计并合成两条针对人bcsc-1基因的干扰序列(bcsc-1 shRNA1和bcsc-1shRNA2)以及对照序列(NS),将其连接入载体PLKO.1-sp6-pgk-GFP中,得到两个干扰载体和一个阴性对照载体。通过菌落PCR、双酶切和DNA序列测定等方法对其进行鉴定。将干扰载体与辅助包装质粒Lipofectamine2000共转染HEK293T细胞包装慢病毒并收取病毒上清。所获慢病毒颗粒感染人乳腺癌细胞MCF-7,QPCR方法检测两种干扰载体对bcsc-1基因的抑制效率。结果 菌落PCR结果显示目的片段插入PLKO.1-sp6-pgk-GFP载体,DNA测序证实插入序列无误。QPCR结果显示两种干扰载体感染人乳腺癌细胞MCF-7后,bcsc-1 shRNA1组和bcsc-1 shRNA2组bcsc-1基因表达水平分别为0.34&#177;0.046和0.63&#177;0.043,较空白对照组和NS组均有明显下降(P<0.05),且bcsc-1 shRNA1抑制效果优于bcsc-1 shRNA2(P<0.05)。结论 成功构建了两种bcsc-1基因慢病毒干扰载体,两载体均能下调人乳腺癌细胞MCF-7中bcsc-1基因表达水平。