摘要：目的　采用双侧穹隆-海马伞切断及双侧卵巢切除方法制作大鼠认知障碍模型,观察4个脑区脑源性神经营养因子(bdnf)表达的变化,以及补充外源性雌激素对bdnf的影响。方法选择健康雌性Wistar大鼠30只,先按2×2方差分析设计分别建立4个模型组:穹隆-海马伞切断组(FF组)、卵巢切除组(OVX组)、卵巢切除加穹隆-海马伞切断组(OF组)和对照组,然后再建立OF组同时给予雌二醇(E2 )治疗组(OF+E2 组)和双侧穹隆-海马伞切断加卵巢切除对照组,每组5只。E2 剂量为1mg/kg,每7天1次皮下注射,共4次28天。观察各组大鼠海马CA1区、皮质区、杏仁复合体区、基底前脑Meynert核区bdnf蛋白表达的变化。结果　(1)经F分析,双侧卵巢切除和双侧穹隆-海马伞切断与否存在主效应和显著交互效应(P<0 001)。FF组、OVX组和OF组的bdnf阳性细胞计数在海马CA1区、皮层、杏仁复合体、Meynert核均明显少于对照组(P<0 001),其中OF组在Meynert核区的bdnf阳性细胞计数少于FF组和OVX组(P<0 01); (2)OF组+E2 组在4个脑区的bdnf阳性细胞数均多于OF对照组(均P<0 01和<0 05)。结论　双侧穹隆-海马伞切断和(或)双侧卵巢切除均可导致大鼠脑内bdnf表达减少,补充外源性雌激素可显著增加bdnf的表达。

摘要：逆转录聚合酶链反应主要用于检测或定量细胞中基因表达水平,是目前生物学及医学等领域研究基因表达调控的一种主要方法,中医药在治疗抑郁症上取得了很好的疗效,为了进一步探索中药对抑郁症的干预途径和寻找作用靶点,许多中医学者近年来成功设计了抑郁症动物模型,并采用逆转录聚合酶链反应技术对抑郁症模型动物的某些神经递质及受体、神经营养因子等进行基因表达分析,在基因水平为揭示中医药对抑郁症的治疗提供了崭新的思路。

摘要：目的:研究大鼠脊髓持续性压迫后NGF、bdnf含量及NGF、bdnf原位基因表达变化,探讨痉、痿证方对大鼠脊髓持续性慢性损伤NGF、bdnf的影响。方法:采用大鼠颈椎前路螺钉压迫颈脊髓,螺钉持续留置压迫30天以产生慢性损伤,蛋白含量用免疫组化EnVision法,基因表达用原位杂交法。结果:(1)免疫组化:统计结果NGF、bdnf结果相近:轻压模型组与假手术组比较,具有显著性差异,P<0.05;析因设计:1试验压迫与药物2因素间无交互作用;药物因素有统计意义;2不同药物因素之间(含模型组)有非常显著性差异,P<0.01。(2)原位杂交:假手术组少见阳性染色的细胞,而模型组和用药组可见明显阳性染色的细胞,NGF和bdnf的阳性细胞特征大致相近。结论:药物干预能促进神经营养因子的分泌,脊髓神经细胞和胶质细胞参与了NGF和bdnf的分泌。

摘要：目的:明确人乳头瘤病毒E6(HPV16 E6)基因变异对宫颈癌细胞增殖影响的机制研究。方法:采用Real-time PCR检测宫颈癌组织及宫颈上皮内瘤样病变Ⅱ级(CINⅡ)宫颈组织样本中HPV16 E6 T350G、脑源性神经营养因子(bdnf)、酪氨酸激酶受体B(TrKB)及肿瘤蛋白53(p53)mRNA的表达水平;设计并构建HPV16 E6 T350G慢病毒(pLV5-HPV16 E6 T350G)及空载体(pLV5-vector),转染人宫颈上皮细胞(HCerEpiC),Real-time PCR检测HPV16 E6 T350G、bdnf、TrKB及p53 mRNA表达水平,以及Western Blot检测bdnf和TrKB蛋白表达水平及磷脂酰肌醇3激酶/丝/苏氨酸激酶(PI3K/AKT)磷酸化水平;细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT)检测细胞增殖情况。结果:与CINII宫颈组织相比,宫颈癌组织中HPV16 E6 T350G、bdnf、TrKB mRNA表达水平均呈阳性,p53 mRNA表达呈阴性;在HCerEpiC细胞中过表达HPV16 E6 T350G后,可上调bdnf和TrKB蛋白与mRNA表达水平,以及激活bdnf/TrkB下游信号通路PI3K/AKT,并且减少p53蛋白表达水平;HPV16 E6 T350G过表达能够增强HCerEpiC细胞的增殖能力。结论:HPV16 E6 T350G过表达可促进宫颈癌细胞增殖能力,可能与上调bdnf/TrkB表达促进PI3K/AKT信号通路的活化进而降低p53表达有关。

摘要：目的:从基因组DNA获取编码脑源性神经营养因子基因,并对目的基因进行序列测定。方法:本研究直接从脑组织中提取人的基因组DNA,根据人的脑源性神经营养因子(bdnf)的cDNA序列,设计一对寡核苷酸引物,采用聚合酶链反应(PCR),体外扩增编码人脑源性神经营养因子基因;扩增产物用自动分析仪进行序列测定。结果:从基因组DNA体外扩增出脑源性神经营养因子基因,序列与文献报道一致。结论:利用PCR直接从基因组获取目的基因,表明人脑神经营养因子基因为单一外显子,目的基因的扩增成功为进一步研究打下了基础。