摘要：目的:构建抑癌基因膀胱癌相关蛋白(blcap)基因高效真核siRNA载体,转染人宫颈癌细胞系HeLa,构建blcap基因沉默细胞系,以观察靶向siRNA对blcap基因的表达抑制作用。方法:设计并重组靶向siRNA各3条,分别命名为pRNA-U6.1-B1,B2,B3-siRNA,重组体经脂质体转染细胞,通过荧光显微镜观察细胞内质粒表达情况,并采用RT-PCR和Western blot方法检测转染前后blcap基因mRNA及蛋白的表达,验证RNAi作用的特异性及时效性。结果:同对照组相比,各blcap siRNA均可引起靶基因表达水平的显著性下降(P<0.05),尤以pRNA-U6.1-B2-siRNA的作用效果最强(P<0.01);而空脂质体组及阴性对照siRNA组的靶基因表达水平则无明显变化。将pRNA-U6.1-B2-siRNA转染细胞后12,24,48h均可观察到靶基因表达的显著性降低(P<0.05),其中在24h后达到最强抑制效果。结论:不同序列的siRNA,对靶基因的干扰效率不同;blcap基因siR-NA能够特异、高效性的抑制靶基因的表达;抑制作用在24h达到高峰,并可维持到转染后48h。试验结果为进一步研究采用RNA干扰技术进行宫颈癌的生物治疗奠定了基础。

摘要：目的　探讨联合运用基因芯片和反义寡核苷酸技术筛选转移相关基因。方法　分别提取两种具有不同转移能力的骨肉瘤细胞总RNA ,反转录cDNA ,用基因芯片筛选差异表达基因 ;从基因芯片筛选结果中选择适当基因 ,设计相应的反义寡核甘酸进行体外实验 ,观测其对细胞生长特性的影响。结果　基因芯片筛选出 11个差异表达基因 ,多与肿瘤发生发展有关。BRCA1和blcap基因反义寡核苷酸均可引起骨肉瘤细胞生长速度变快、克隆形成率增高、增殖活性增强。结论　联合运用基因芯片和反义寡核苷酸技术可以有效地筛选转移相关基因 ,为进一步研究提供有益的参考。