摘要：试验设计3对引物,采用PCR产物直接测序检测bmp2基因在短毛黑水貂和咖啡水貂共252个个体中的单核苷酸多态性,分析该基因对水貂毛长性状的影响,并对序列进行了分析。结果表明,外显子1、2和3在2个水貂品种中均无多态性;内含子1有1个SNPs:C159T位点,但是和毛长性状无相关性。水貂扩增序列与雪貂的同源性为98.2%,与其它哺乳动物的同源性都在81.2%以上。研究结果表明,水貂bmp2基因外显子1、2和3序列保守性高,该区域不是影响水貂毛长的功能结构域。

摘要：参照GenBank已公布的绵羊bmp2基因序列与牛bmp4基因序列分别设计一对引物,以川中黑山羊卵巢总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增川中黑山羊bmp2基因和bmp4基因的cDNA序列并进行克隆、测序及相关生物信息学分析。结果表明,川中黑山羊bmp2基因编码区全长为1 188 bp(GenBank登录号为KF492982),bmp4基因编码区全长为1 230 bp(GenBank登录号为KF492983),分别编码395、409个氨基酸。川中黑山羊与绵羊、牛、猪、人、马、鼠、鸡bmp2基因编码区序列的同源性分别为99.7%、98.7%、92.0%、89.6%、91.4%、86.1%、78.9%;川中黑山羊与绵羊、牛、猪、人、马、鼠、鸡bmp4基因编码区序列的同源性分别为99.3%、99.1%、95.9%、95.2%、94.4%、92.0%、80.1%。用MEGA 4.0构建物种间分子系统进化树,结果显示,bmp2基因和bmp4基因的聚类反应基本一致,川中黑山羊首先与绵羊聚类,再分别与牛、猪、马、人和鼠聚类,最后与鸡聚类,这与动物分类学基本吻合。

摘要：目的扩增bmp2基因下游110kb处的预测有增强子功能的非编码序列,将其插入pGL3-promoter载体,构建该长片段的真核表达系统。方法在所设计的上下游引物的5’端加入BamHⅠ酶切位点,采用聚合酶链反应(PCR)的方法从短指畸形患者外周血提取的DNA中扩增bmp2基因下游区域预测有增强子功能的一段长约5kb的非编码序列。首先将扩增的目标片段与PGEM-T载体连接,连接产物转化DH5α感受态细菌,经蓝白斑筛选出的阳性克隆通过电泳、酶切鉴定后进行测序验证是否为插入的目标序列,测序正确后提取重组质粒。利用限制性内切酶BamHⅠ同时酶切插入目标序列的质粒和pGL3-promoter载体,将酶切完全的目标序列与线性pGL3-promoter空质粒载体在Solution I快速连接酶的作用下进行连接反应,构建目标序列的真核表达载体。结果经过酶切和测序证实含有4.8kb长的目标序列的分子克隆和真核表达载体构建成功。结论实验成功克隆了bmp2基因下游区域预测有增强子功能的一段长约5kb的非编码序列,并构建了pGL3-promoter-enhancer真核表达载体,为进一步验证该序列可能的调控功能奠定了基础。