摘要：目的构建braf基因序列特异性的短发卡RNA(shRNA)质粒载体,检测其对人黑素瘤细胞braf基因的干扰作用。方法设计2条braf基因序列特异性的shRNA编码序列和1条非特异性阴性对照序列,插入质粒pGenesil-1,双酶切和测序鉴定。用构建成功的3条质粒转染人黑素瘤细胞株A375和M14,分别采用RT-PCR和蛋白印迹检测其braf基因的mRNA和蛋白表达。结果所设计的shRNA序列被正确插入质粒pGenesil-1。非特异性对照质粒neg对黑素瘤细胞braf基因表达不产生干扰,2条序列特异性质粒braf 1和braf 2抑制了braf基因mRNA和蛋白的表达,其中braf 1干扰效果最为明显,最高抑制率可达90%。结论质粒介导的shRNA可成功干扰人黑素瘤细胞braf基因的表达,其抑制时间可持续至少1个月。