摘要：【目的】胶原蛋白具有特殊的三螺旋结构,对常见的蛋白酶具有抗性,只能被特定蛋白酶(胶原蛋白酶)水解。微生物胶原蛋白酶由于其较低的要求和较高的生产率,在胶原废物的高值化利用中发挥着重要作用。本研究拟通过单因素优化及响应面法优化,提高胶原蛋白酶产生菌的产酶量。【方法】通过单因素试验探究培养时间、温度、pH、接种量、装液量、碳源、氮源及金属离子等对胶原蛋白酶产生菌bacillus ***-23的产酶影响;在此基础上利用PB试验筛选出显著影响因素,最后通过CCD试验确定最佳发酵产酶工艺条件。【结果】通过PB试验筛选出葡萄糖、酵母浸粉、接种量和Fe^(2+)等4个显著影响因素,通过响应面法确定了最佳产酶发酵工艺:培养时间36 h、培养温度37℃、培养基pH值8.0、接种量2.97%,葡萄糖19.60 g/L、酵母浸粉25.80 g/L、Fe^(2+)0.75 mmol/L、NaCl 10 g/L。在该优化条件下,bacillus ***-23所产胶原蛋白酶活力达到28.13 U/mL,较优化前的酶活(5.94 U/mL)提高4.73倍。【结论】经过单因素、PB设计和响应面逐级优化,显著提高了bacillus ***-23发酵产胶原蛋白酶的酶活,为该菌株工业化应用于胶原蛋白活性肽开发提供了理论基础。