摘要：采用生物信息学方法比对多种低温诱导植物的cbf1同源基因,在其保守区域设计一对兼并引物,在特殊的RT-PCR条件下,结合反向PCR技术对山葡萄低温诱导转录因子cbf1的全长基因进行了克隆,经测序和序列分析显示,山葡萄转录因子cbf1基因ORF长为753 bp,无内含子,编码251个氨基酸,编码蛋白分子量和等电点分别为27.503 kD和3.11,属酸性蛋白质。应用Blast软件将山葡萄转录因子cbf1基因与大麦(Hordeum vulquare)、水稻(Oryza sativa)等10种植物cbf1基因氨基酸序列比较同源性达到80.7%,且在AP2/EREBP结构域有高度的保守性,表明已成功克隆山葡萄(Vitis amurensis)转录因子cbf1基因,将其命名为Vicbf1,在GenBank上的登录号为DQ517296。

摘要：[目的]为获得耐低温安祖花奠定基础。[方法]利用农杆菌介导cbf1基因侵染安祖花,并研究不同浓度乙酰丁香酮(AS)和侵染时间对转化后安祖花抗性愈伤组织的存活率和抗性芽分化率的影响。[结果]以重组质粒pBI121-cbf1为模板,利用cbf1cDNA全长的引物序列进行PCR扩增,获得约650bp的片段,表明重组质粒构建成功。在抗性培养基上筛选12周后,部分愈伤组织褐化死亡。用100μmol/LAS作为诱导物质时,抗性愈伤组织存活率和抗性芽的分化率较高。农杆菌侵染时间对转化后愈伤组织存活率和抗性芽分化率有一定影响。[结论]当AS浓度为100μmol/L、侵染时间为10min时,抗性愈伤组织的存活率及分化率最高,分别为48.6%和11.46%。

摘要：根据已发表的小麦(***)转录因子cbf1基因序列(GenBank Accession ***376136),设计引物从小麦品种‘京花1号’叶片中克隆出该基因,用拟南芥RD29B基因为启动子构建含cbf1基因的逆境诱导表达载体pBAC127F(6 967 bp),以‘99-92’、‘5-98’、‘104’和‘轮选987’等冬小麦品种(系)的幼穗和幼胚为材料,基因枪转化该表达载体。经筛选与植株再生,共获得14株转基因植株及其后代株系。这14个株系经PCR分析和点杂交检测,最终确认了5-98-40、5-98-41这2个株系为转基因株系,结果表明拟南芥RD29B启动子调控下的转录因子cbf1基因已稳定整合到转基因植株中。

摘要：根据欧洲葡萄cbf1基因序列设计1对特异引物,采用PCR方法从山葡萄、贝达、SO4、Ln33和黑比诺的基因组中各扩增出1个DNA片段并克隆到pMD18-T载体中。经序列测定和分析,各片段均长756 bp,与欧洲葡萄cbf1基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列分别具有98%和99%的同源性,而且推导的氨基酸序列中包含有同源性更高的AP2/EREBP DNA结合域,以及cbfs蛋白的两段特征序列(PKK/RPAGRxKFxETRHP和DSAWR)。结果表明从5种葡萄中均可以克隆出cbf1基因。