摘要：吡咯烷与正丁烷类ccr5(化学趋化因子受体5)拮抗剂可通过抑制人类免疫缺陷病毒(HIV-1)包膜蛋白与ccr5的相互作用而阻断病毒进入细胞.本文使用已知拮抗剂结构和活性信息构建了一个三维药效团模型.按照Catalyst/HypoGen模块的要求,选择了25个结构和活性均具备差异性的分子作为药效团产生的训练集.其中训练集分子以IC_(50)值表示的生物活性值跨度为0.06到10000 nmol·L^(-1).最好的药效团模型(Hypo 1)由两个正离子化特征以及三个疏水特征组成,训练集预测相关系数为0.924,均方根偏差为1.068.模型用于预测由74个分子组成的测试集化合物活性,结果表明模型可以提供较好的活性预测结果并用于新的拮抗剂的设计.

摘要：趋化因子ccr5是HIV-1入侵机体细胞的主要辅助受体之一,通过抑制ccr5的表达可以在一定程度上阻断HIV-1的复制进程.miRNA介导的RNA干扰相比经典的siRNA在应用中具有更多的特点.本研究的目的是构建可特异有效靶向ccr5的人工miRNA元件.本研究以ccr5基因序列为模板设计了14个miRNA靶序列,以天然miR-30a为基础骨架通过靶序列区替换构建人工miRNA元件.通过将miRNA表达质粒与携带靶序列区的报告质粒的共转染抑制实验检测不同miRNA的抑制效率,结果显示miccr-13A具有较好的抑制效率和特异性.进一步将miccr-13A表达载体转染ccr5阳性的HIV-1受体细胞株TZM-b1,RT-PCR检测显示miccr-13A可在细胞中获得有效表达,同时应用免疫流式细胞术检测显示在miccr-13A转染细胞相比对照细胞的ccr5蛋白的检测活性明显降低.进一步的研究显示miccr-13A在细胞中不会影响细胞活性和干扰素效应相关基因osa1和stat1 mRNA水平,具有良好的特异性.本研究获得的可特异靶向ccr5的人工miRNA元件可为进一步的抗HIV-1研究提供重要基础.

摘要：目的:抑制细胞表面人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的辅助受体ccr5表达,阻止HIV-1进入靶细胞。方法:设计ccr5靶向的发夹状siRNA,合成2条互补的寡核苷酸链,退火后重组入pRNAT-U6.2载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹pRNAT-U6.2-siccr5后转染U937细胞,采用RT-PCR和流式细胞术分别检测ccr5基因mRNA和蛋白表达的变化。结果:重组子pRNAT-U6.2-siccr5,经过测序鉴定与设计一致。RT-PCR检测显示,转染pRNAT-U6.2-siccr5细胞的ccr5基因表达水平显著降低于未转染对照组和转染空载体细胞(P<0.05)。未转染对照组U937细胞表面ccr5的表达率为(83.10±6.52)%,转染空载体组为(81.44±4.97)%,转染pRNAT-U6.2-siccr5组为(1.94±0.06)%,3组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建出沉默细胞ccr5基因表达的siRNA载体。

摘要：存在于巨嗜细胞、树突状细胞等胞膜上的G蛋白偶联受体ccr5作为R5嗜性的HIV-1病毒的主要共同受体,可以和病毒的表面糖蛋白gp120相互作用,并由此决定了病毒的另一表面糖蛋白gp41融合构象的形成以及随后的病毒与细胞的膜融合。ccr5在细胞膜上迅速移动,并与其他分子(如CD4和胆固醇)存在相互作用,加速了与gp120的作用。ccr5的这种中心作用已经使其成为抗HIV-1药物研究的很有吸引力的靶点。目前已发现一系列衍生于ccr5的胞外区的多肽、天然存在的蛋白质以及设计的多肽,可干扰ccr5与gp120之间的相互作用,从而抑制病毒复制。

摘要：目的筛选沉默ccr5基因的靶点并验证多靶点沉默ccr5基因的效果。方法检索人ccr5基因的cDNA序列,设计针对ccr5 mRNA的siRNA,选择与靶基因结合具有高特异性的3个siRNA序列,合成shRNA双链,构建多靶点沉默ccr5重组质粒。同时合成ccr5过表达质粒。经测序验证后进行质粒慢病毒包装。首先,用ccr5过表达慢病毒转染Jurkat T细胞,实时荧光逆转录定量聚合酶链反应(real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测ccr5过表达情况。Control组(空白对照)为Jurkat T细胞,将ccr5过表达细胞分组为ccr5-OE组(ccr5过表达)、ccr5-OE-NC组(ccr5过表达阴性对照)、ccr5-OE-沉默组(ccr5过表达沉默)。RT-qPCR和Western bolt检测ccr5沉默重组质粒对目的基因的沉默效果。实验中各项数据的分析选用SPSS软件,作图选用GraphPad Prism软件。结果测序结果证明,ccr5过表达质粒含有目的序列,ccr5沉默重组质粒中含有3个目的靶点序列。RT-qPCR检测ccr5过表达情况显示,细胞ccr5的基因表达显著升高,可进行后续实验。ccr5沉默慢病毒感染后,RT-qPCR和Western bolt检测各组ccr5表达结果显示,多靶点ccr5沉默组的ccr5基因表达水平和蛋白表达水平较ccr5-OE组降低(P均<0.05)。结论成功构建多靶点沉默ccr5基因重组质粒,验证多靶点沉默ccr5基因的有效性,为基因编辑治疗艾滋病提供实验数据。

摘要：构建CC型趋化因子受体5(ccr5)基因shRNA的真核表达载体,探讨沉默ccr5对乳腺癌细胞黏附与迁移能力的影响。在多种人乳腺癌细胞中检测ccr5的基因表达,选择ccr5表达较高的MDA-MB-231细胞做为基因沉默的研究对象;设计并合成2对靶向人ccr5基因的RNA沉默序列,连入基因沉默载体pSilencer 2.1-U6中,构建沉默质粒shccr5-1和shccr5-2,定量PCR和蛋白印迹法检测ccr5基因沉默的效率;以细胞黏附实验和Transwell趋化小室实验分别检测沉默ccr5对MDA-MB-231细胞黏附和迁移能力的影响。结果表明,沉默ccr5可以抑制MDA-MB-231细胞的黏附能力,同时显著降低MDA-MB-231细胞的迁移和趋化。

摘要：目的 :克隆人 ccr5 5′侧翼调控序列及其基序分析。方法 :设计单引物 ,利用单向多循环 PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化人 ccr5 5′侧翼调控序列基因组 DNA,PCR产物作为序列分析模板。 结果 :得到长为 1.5 kb的人 ccr5 5′侧翼调控序列基因组 DNA序列 ,并对该区域的基序进行了分析。结论 :该方法适合于基因组 DNA,特别是逆向扩增一些读框区 5′侧翼调控序列。

摘要：目的设计合成一系列具有新型结构特征的双环哌啶类C-C族趋化因子受体5(ccr5)抑制剂并测定其抗HIV-1活性。方法以HIV-1辅助受体ccr5抑制剂Vicriviroc的结构为模板,通过改变左侧哌嗪结构、取代基位置等方法设计并合成一系列新化合物。并利用MS及1H-NMR谱对这些化合物进行结构表征。结果与结论合成了15个新结构化合物,活性测试结果表明,该系列化合物具有较强的抗HIV-1 R5病毒株的活性(IC50=1.20～66.24μmol.L-1)。当R1为芳基结构且两个氮原子满足标准的丙二胺结构时,化合物的活性更好。

摘要：通过病毒表面的包膜糖蛋白gp120与细胞表面受体CD4和趋化因子受体ccr5相互作用进入宿主细胞,是人类免疫缺陷病毒(HIV)致病的关键。本文对HIV pg120的结构、gp120与CD4和ccr5的相互作用及其对新型艾滋病疫苗研制的意义作一简要综述。

摘要：Medscape：我是Medscape网站艾滋病研究组的Mary Anderson博士，我正在洛杉矶的逆转录病毒与机会性感染会议（CROI）上采访蒙特利尔McGill大学艾滋病中心主任Mark Wainberg博士。Wainberg博士，在昨晚的会议上我们听到了有关抗逆转录病毒药物（ARVs）研究的重要资料，其中包括实验药物的研究结果，如果通过审批，正在开发的制剂将是该类药物中的第一个抗逆转录病毒药物，非常感谢您跟我们谈论这个重要的话题。会议介绍了针对ccr5拮抗剂maraviroc进行的两项研究，这些研究设计的主要特点是什么？研究数据是否支持此药物可以被纳入抗逆转录病毒的治疗药物？