摘要：肿瘤干细胞具有肿瘤形成、自我更新和抗化疗的特性,因而受到广泛关注和研究。cd133作为重要的肿瘤干细胞标志物与肿瘤细胞的干性与恶性密切相关。本研究筛选并且鉴定了cd133的3个H2-K^d限制性的细胞毒性T细胞(CTL)的表位,分别是cd133_(419–428)、cd133_(702–710)和cd133_(760–769)。将重组热休克蛋白gp96为佐剂联合cd133表位制备表位疫苗,将疫苗免疫cd133^+白血病移植的小鼠后引发抗肿瘤的特异性T细胞免疫应答。转输cd133表位特异的T细胞同样可以抑制小鼠淋巴瘤的生长。该研究为设计抗cd133^+的白血病和其他肿瘤的表位疫苗提供了依据。

摘要：目的系统评价cd133蛋白表达与胃癌及其临床病理特征的相关性。方法计算机检索PubMed、EMbase、WebofKnowledge、TheCochraneLibrary（2013年第10期）、CBM、VIP（1989～2013．10）、CNKI及WanFangData，查找国内外公开发表的关于cdl33蛋白表达与胃癌及其临床病理特征相关性的病例一对照研究，检索时限均为从建库至2013年10月。由两位研究者按照纳入和排除标准筛选文献、提取资料并评价质量后，采用RevMan5．2软件进行Meta分析。结果最终纳入9个病例一对照研究，共623例患者。Meta分析结果显示：cdl33蛋白在胃癌组与癌旁和正常胃组织组[OR=3．89，95％CI（1．87，8．11），P=0．0003]、淋巴结转移组与无淋巴结转移组[OR=2．75，95％CI（1．99，3．81），P〈0．00001]、胃癌Ⅲ-Ⅳ期组与Ⅰ～Ⅱ期组[OR=2．83，95％CI（2．13，3．76），P〈0．00001]、伴远处转移组与无远处转移组[OR=2．38，95％CI（1．47，3．85），P=0．0004]的表达差异均有统计学意义。但在高中分化组与低分化组的表达差异无统计学意义[OR=I．70，95％CI（0．90，3．21），P=0．103。结论cdl33蛋白的表达与胃癌患病及其淋巴结转移、远处转移及临床分期等有明显相关性，提示其在胃癌发生、发展过程中可能起重要作用。受纳入研究质量限制，上述结论尚需更多大样本、设计严谨的高质量研究加以验证。

摘要：背景：有研究表明端粒酶活性抑制剂不仅能抑制或杀死肾癌细胞,而且对决定肾癌发生发展的干细胞也有作用。目的：观察无血清悬浮培养的肾癌干细胞表面标志cd133及端粒酶活性的表达情况,并与含血清培养的肾癌细胞作比较。设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2008-06/2009-02在江苏大学完成。材料：手术切除肾癌周围新鲜的正常肾组织标本由江苏大学附属医院提供,肾癌干细胞株OS-RC-2由上海中科院细胞库提供。方法：取处于对数生长期的肾癌干细胞OS-RC-2,胰酶消化后离心弃上清,悬浮于含EGF、bFGF的DMEM/F12无血清培养基中,调整细胞浓度为2×10^8L-1进行接种,在37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中悬浮培养。以含血清培养的肾癌细胞及正常肾组织细胞作为对照。主要观察指标：倒置显微镜下观察细胞生长情况,流式细胞仪检测肾癌干细胞cd133及cd34的表达,采用TRAP实时定量检测肾癌干细胞端粒酶活性。结果：肾癌干细胞接种于无血清培养基后,细胞呈圆形悬浮于培养液中;2d后有细胞球生成,每个细胞球含3~8个细胞,折光性较强;7d后细胞球明显增多,体积增大,为规则的圆形或卵圆形。无血清悬浮培养的肾癌干细胞球cd133＋cd34-率明显高于含血清培养的肾癌细胞cd133＋cd34-率,正常肾组织细胞未测出有cd133及cd34的表达,3者间比较差异有显著性意义（F=328.25,P〈0.05）。肾癌干细胞球和肾癌细胞端粒酶活性均高于正常肾组织细胞（F=278.74,P〈0.05）,而前2者间端粒酶活性无明显差异。结论：与含血清培养的肾癌细胞相比,无血清悬浮培养的肾癌干细胞表面标志cd133呈明显高表达,二者端粒酶活性均高于正常肾组织。

摘要：目的肿瘤干细胞是肿瘤复发和转移的原因。探讨cd133基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)的重组质粒,对人肝癌细胞株MHCC-H的cd133基因表达、上皮间质化和侵袭能力的影响。方法通过免疫磁珠分选MHCC-H细胞中的cd133阳性细胞,设计并合成特异性靶向cd133的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段,并构建pSuper retro GFP-neo-siRNA-cd133表达质粒,将其转入MHCC-H-cd133+细胞,并设空白对照组、阳性对照组。通过G418筛选出稳定株。通过粘附实验、Boyden小室实验和软琼脂克隆形成实验观察各细胞株侵袭能力的变化。采用明胶酶法测定肝癌细胞的基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9的含量,蛋白质印迹法检测上皮间质化相关基因的变化。结果通过免疫磁珠分选后的MHCC-H细胞中cd133表达率为83.5%。qRT-PCR结果显示,shcd133组相对空白对照组的cd133表达量下降了80%,P<0.05。蛋白质印迹法检测结果显示,shcd133组的cd133表达明显下降,约为空白对照组的12%和shNC组的10%,均P<0.05。shcd133组的粘附能力为86.9±12.4,较空白对照组的568.5±53.2和shNC组的538.8±35.6明显下降,P<0.05。Boyden小室实验发现,shcd133组穿膜细胞数为(80.6±11.4)个,较空白对照组的(228.5±33.2)个和shNC组的(230.8±32.9)个明显减少,P<0.05。软琼脂克隆形成率的检测发现,shcd133的细胞克隆形成(60±5)个,比空白对照组的(178±23)个和shNC组的(168±25)个明显下降,P<0.05。明胶酶法检测发现,shcd133组MMP-2和MMP-9相对活性为0.4±0.14和0.6±0.16,较shNC组的1.03±0.19和1.3±0.16明显下降,P<0.05。蛋白质印迹法检测结果表明,shcd133组N-cadherin蛋白表达为36.3±4.5,Snail为53.6±6.7,Slug为41.63±5.6,Twist为39.4±3.9,均明显低于空白对照组的87.6±8.6、80.6±7.5、81.9±9.2和83.9±9.1,也明显低于shNC组的89.4±9.6、83.5±8.9、85.1±8.7和87.6±9.3,均P<0.05;而shcd133组E-cadherin表达为88.4±9.2,较空白对照组的57.6±8.7和shNC组的53.9±8.9明显上调,P<0.05。结论沉默MHCC-H细胞cd133基因的表达能有效抑制其上皮间质化和侵袭能力,cd133基因可能成为肝癌基因治疗的有效靶点。

摘要：背景:肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)是线粒体特异性热休克蛋白90家族的同源基因。大量研究表明其过量表达与多种癌症的发生密切相关。但其在喉鳞癌发生中的作用及作用机制目前还不清楚。目的:探讨RNA干扰能否靶向抑制TRAP1过表达以及对人喉癌干细胞增殖和凋亡的作用效果。方法:采用免疫磁珠技术从人喉癌Hep-2细胞系中分选出cd133^+cd44^+喉癌干细胞。设计及合成TRAP1的sh RNA序列,Lipofectamine^(TM) 2000转染cd133^+cd44^+喉癌干细胞。CCK-8增殖实验、集落形成实验、流式细胞术检测干扰TRAP1基因表达对cd133^+cd44^+喉癌干细胞增殖和凋亡的影响,采用分光光度法检测细胞内caspase-3,caspase-8,caspase-9活性。结果与结论:(1)TRAP1 sh RNA转染的cd133^+cd44^+喉癌干细胞内TRAP1基因和蛋白表达明显下调(P<0.01);(2)与空白对照组和转染空质粒阴性对照组比较,TRAP1表达下调抑制了cd133^+cd44^+喉癌干细胞增殖和集落形成能力(P<0.05);(3)与空白对照组和转染空质粒阴性对照组比较,TRAP1表达下调增加cd133^+cd44^+喉癌干细胞凋亡率(P<0.05);(4)TRAP1 sh RNA介导细胞凋亡与caspase-3,caspase-8和caspase-9激活有关;(5)结果提示RNA干扰TRAP1表达可抑制cd133^+cd44^+喉癌干细胞生长并促进细胞凋亡。TRAP1可能为喉鳞癌治疗的基因靶点。

摘要：目的:构建肿瘤特异性启动子Survivin驱动的小发夹RNA(shRNA),通过下调HepG-2肝癌细胞中cd133的表达,探讨其对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:①构建pEntr-Surp-shRNA真核表达载体,转染HepG-2肝癌细胞,Hela细胞,293T细胞。②设计shRNA干扰片段,筛选干扰最佳干扰效率的cd133干扰片段,重组载体***-shRNA972,***2377,***-shRNA485并筛选出稳定表达shRNA的转染克隆。③***-shRNA972,***-shRNA2377,***485腺病毒分别转染HepG-2肝癌细胞株,建立***-shRNA972,***-shRNA2377,***-shRNA485实验组,未转染腺病毒组为空白组。感染肝癌细胞株,应用RT-PCR和Western blot检测cd133 mRNA和蛋白的表达,MTT法和Transwell法检测细胞体外增殖和侵袭能力。结果:①成功构建了Survivin启动子调控的shRNA真核表达载体pEntr-Surp-shRNA,在293T细胞株无荧光,而在Hela、HepG-2细胞株中荧光表达明显,证实Survivin具有肿瘤特异性。②成功包装***972,***-shRNA2377,***-shRNA485腺病毒。③RT-PCR和Western blot检别显示***-shRNA972、***2377,有封闭cd133 mRNA和蛋白表达的效果;计算实验组与空白组相比mRNA抑制率分别为(63.44±0.02)%、(56.98±0.03)%;***-shRNA972、***-shRNA2377、***-shRNA485组蛋白抑制率分别为(55.43±0.40)%、(48.65±0.20)%、(34.67±0.40)%;实验组细胞的增殖和侵袭能力也受到明显抑制,***-shRNA972组生长抑制率为(72.88±0.74)%,***-shRNA2377组生长抑制率为(59.90±0.87)%,***-shRNA485组生长抑制率为(30.18±0.95)%。结论:肿瘤特异性启动子Survivin调控腺病毒介导的shRNA能显著下调cd133基因的表达,抑制肝癌细胞株HepG-2的增值和减弱其侵袭力。

摘要：背景:脐血中富含早期干细胞的一个亚群cd133+细胞,该亚群是具有广泛的增生和分化潜能的原始细胞,被认为具有向神经细胞分化的潜能。目的:假设脐血cd133+细胞对改善痴呆小鼠的认知功能和存活有使用价值,检测脐血cd133+细胞移植后痴呆鼠的认知和存活功能的变化,拟予验证。设计、时间和单位:完全随机区组设计的动物实验,于2005-09/2007-01在天津血液学研究所完成。材料:选用48只雄性APP695转基因小鼠,随机分为3组:对照组(n=8)、cd133+细胞移植组(n=20)和cd133-细胞移植组(n=20)。方法:对照组小鼠经脑室注射10μL磷酸缓冲液(PBS),cd133+细胞移植组和cd133-细胞移植组分别经脑室注射10μLcd133+(5×104/μL)和cd133-(5×104/μL)脐血细胞移植。主要观察指标:以水迷宫实验评价转基因小鼠在细胞移植后的认知功能,并记录移植后小鼠的存活时间。以Dil荧光标记法和免疫组化检测移植细胞的分化类型。结果:在移植后30d,cd133+细胞移植组小鼠的认知功能明显好于cd133-细胞移植组和对照组,差异有显著性意义(P<0.05),这种改善效果在移植后180d仍然存在(P<0.05)。cd133+细胞移植组小鼠平均存活时间比cd133-细胞移植组和对照组明显延长,差异有显著性意义(P<0.05)。标记有Dil的脐血细胞在移植后30d已经迁移到多个脑区,其中主要在双侧顶叶皮质和海马区,并且能够表达神经细胞标志Ⅲ型β微管蛋白、神经微丝、神经烯醇化酶和胶质酸性蛋白。cd133-细胞移植组脑切片内,Dil标记的脐血源细胞主要分布在侧脑室及其周围,很少能检测到阳性胶质酸性蛋白,Ⅲ型β微管蛋白,或神经烯醇化酶的脐血细胞。移植后30d,cd133+细胞移植组Dil标记的脐血细胞表达III型β微管蛋白的百分率明显高于180d,表达神经烯醇化酶的脐血细胞百分率明显低于180d,差异均有显著性意义(P<0.01)。结论:实验结果提示,移植cd133+细胞后出现的对认知功能改善和对存活时间延长的作用,可能主要归功于移植细胞对功能不良细胞的替代或者对神经环路的改善。

摘要：背景:肿瘤干细胞标志物cd133在非小细胞肺癌发生、发展过程中的作用存在争议。目的:系统评价有关非小细胞肺癌组织中cd133表达及临床意义的病例对照研究。方法:计算机检索PubMed、EMBASE、Web of Science、中国生物医学文献数据库(CBM)、中文科技期刊全文数据库(VIP)、中国期刊全文数据库(CNKI)及万方数据库,并辅以文献追溯的方法,收集国内外发表的相关病例对照研究,检索时间均从建库至2012年9月。两位研究者按纳入排除标准筛选文献并评价纳入研究质量,应用RevMan5.1软件进行Meta分析。结果与结论:共纳入10个病例对照研究,包含非小细胞肺癌组织808例。Meta分析结果显示:在cd133表达方面,非小细胞肺癌组织比癌旁组织或正常组织高[OR=8.15,95%CI(4.61,14.41),P<0.00001],有淋巴结转移的非小细胞肺癌组织比无淋巴结转移的高[OR=1.83,95%CI(1.06,3.17),P=0.03],中低分化的非小细胞肺癌组织比高分化的高[OR=2.09,95%CI(1.42,3.08),P=0.0002];非小细胞肺癌组织病理分级Ⅰ级和临床Ⅱ-Ⅲ级cd133表达的差异无显著性意义[OR=1.06,95%CI(0.66,1.70),P=0.81]。现有研究表明,cd133在非小细胞肺癌发生、发展过程中可能起重要作用,但其能否作为非小细胞肺癌诊断及预后的可靠指标尚不确定,需要进行更多设计严谨、细致的高质量流行病学研究来进一步证实。

摘要：本研究检测骨髓细胞的cd271、cd133和cd34的表达,分析细胞表达cd271与cd133及cd133与cd34的相关性。根据不同设计组合用cd45-PerCP、cd271-PITC、cd133-PE和cd34-FITC标记骨髓细胞,获得细胞后以FSC、SSC和cd45反复对细胞群进行定位和筛选,然后用流式细胞术检测骨髓细胞和骨髓单个核细胞(MNC)的上述表达。结果表明,骨髓细胞cd271+、cd133+和cd34+表达率分别为0.16%、0.20%和0.43%,骨髓单个核细胞分离后cd271+、cd133+和cd34+表达率分别0.49%、0.47%和1.07%;骨髓细胞的cd271+cd133+共表达率为0.02%,单个核细胞分离后的cd271+cd133+的共表达率为0.03%。90%cd133+细胞表达cd34,40%cd34+细胞表达cd133。结论:建立的三色荧光联合检测方法可作为检测骨髓中cd271+,cd133+和cd34+细胞的方法。cd271阳性细胞与cd133和/或cd34阳性细胞是不同的细胞群,cd271可能在评价和指导骨髓间充质干细胞的临床治疗中有重要意义。

摘要：目的比较3段化学合成的siRNA对KATO-Ⅲ胃癌细胞中cdl33基因的抑制效果，并初步探讨cdl33基因表达被抑制后对胃癌细胞增生的影响。方法实验分为空白对照组、阴性对照组、cdl33siRNA-1组，cd133siRNA-2组和cd133siRNA-3组。针对cd133mRNA序列设计并合成3段siRNA，利用荧光标记的siRNA转染KATO-Ⅲ胃癌细胞后，通过共聚焦显微镜荧光计数检测其转染率，用RT—PCR法和Western blot法检测并比较3段siRNA对cd133基因表达的沉默效果，采用CCK-8法检测cd133表达被抑制后对胃癌细胞增生的影响。结果siRNA在KATO—Ⅲ细胞中的转染效率可达到（85±8）％，所设计的3段siRNA均可显著抑制胃癌KATO—Ⅲ细胞cd133基因的表达，抑制率分别为（11±2）％、（19±2）％和（24±3）％。与空白组比较，cdl33siRNA-3转染组细胞的增生活性降低了（42±4）％（P〈0．05）。结论成功转染并抑制了KATO—Ⅲ胃癌细胞中cd133基因的表达，并从中筛选出了干扰效果最佳的cdl33siRNA片段，为后续cd133^＋胃癌细胞的干扰提供初步的实验研究。