摘要：目的在真核细胞中表达Zhejiang Children’s Hospital（ZCH）-7-2F9（简称2F9）单链抗体（scFv2F9）以获得高活性的目的蛋白，为2F9其他类型的基因工程抗体及其免疫毒素的研究奠定基础。方法根据pSectag2A多克隆位点、（G4S）3及scFv2F9基因序列，设计含有SfiI、EcoRI酶切位点、6×His以及终止密码TGA的引物，采用高保真的Taq酶，通过重叠延伸拼接法（splicing by overlap extension，SOE）扩增克隆到scFv2F9基因，将扩增到的目的基因片段克隆到pGEM T—easy载体，测序核实后再克隆到pSectag2A真核分泌型表达载体中。阳性重组质粒pSectag2A／scFv2F9转染中华仓鼠卵巢（CHO）细胞进行目的蛋白的瞬时表达，将培养上清浓缩后，流式细胞术观察其对亲本单抗的阻滞效果。结果真核分泌型表达载体pSectag2A／scFv2F9在CHO细胞中获得成功表达，其相对分子质量为31000。亲本直标单抗2F9-FITC被真核细胞表达的scFv2F9阻滞后其阳性细胞百分数、平均荧光强度和最高峰值分别下降了90．02％、63．30％和63．38％。结论克隆到的2F9V。和2F9VL基因及构建的真核分泌型表达载体pSectag2A／scFv2F9是正确的，scFv2F9在CHO细胞中获得成功的表达，且有较高的识别和结合人cd14抗原的功能。

摘要：背景:如何减轻甚至消除脂多糖(LPS)引起的全身炎症反应是目前研究的热点;库普佛细胞(KC)的激活与LPS的这种作用密切相关,但关于其具体的机制尚有待于进一步研究。目的:探讨LPS对KCcd14表达的影响及cd14在LPS激活KC中的意义。设计:完全随机前后对照研究。地点和对象:在第三军医大学西南医院病理学研究所完成。大鼠KC来源于Wistar大鼠,购自第三军医大学实验动物中心。干预:在分离培养大鼠KC的基础上,作者应用LPS直接或LPS刺激KC后产生的介质刺激新培养的KC,或在血清存在的情况下加入抗cd14单抗或在无血清的情况下单独加入LPS等措施刺激KC细胞。主要观察指标:各种条件下cd14mRNA的表达及其蛋白合成的变化、培养KC中上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和一氧化氮浓度。结果:①cd14mRNA表达及其蛋白合成在正常KC中极弱,分别为0.035和19.91±2.89,浓度为10mg/L的LPS分别为0.73和676.79±24.95,其量与LPS浓度呈剂量依赖性相关。浓度为10μg/L的LPS刺激后KC中cd14mRNA表达及其蛋白合成在30min即明显增强,分别为0.56和548.86±40.43,至6h达高峰(0.54和673.91±35.08)。②在血清存在时加入抗cd14单抗或在无血清时单独加入LPS,可明显降低KCTNF-α,IL-6和一氧化氮的释放。而后者如果同时加入LBP,则可?

摘要：根据GenBank发表的荷斯坦奶牛cd14基因的序列设计引物,通过PCR方法对南阳黄牛的cd14基因进行分段扩增并测序,拼接后得到包含cd14完整编码区以及5’端和3’端非编码区的2 969 bp的全序列。序列分析结果表明:南阳黄牛cd14基因开放阅读框全长966 bp,共编码321个氨基酸,碱基组成分别为A(18.4%)、T(18.4%)、C(32.9%)、G(30.2%),编码区与荷斯坦奶牛cd14基因相比发生了2个碱基突变,没有引起氨基酸的改变。在5’端和3’端存在较长的非编码区,与荷斯坦奶牛cd14基因相比发生了7个碱基突变。南阳黄牛的cd14基因与荷斯坦奶牛、水牛、绵羊、山羊、猪、猕猴、大猩猩、人、小鼠的同源性依次降低,分别为99.8%、98.2%、96.8%、92.8%、83.5%、79.8%、79.7%、79.5%、71.9%。进化树所得的聚类结果与传统的分类结果一致。通过蛋白质结构预测,发现南阳黄牛cd14没有跨膜结构域。

摘要：在用牛肺巨噬细胞构建了ｃＤＮＡ基因文库的基础上，参照人和小白鼠ＣＤ１４的基因序列设计一对引物，用ＰＣＲ方法成功地扩增出编码牛ＣＤ１４的特异性ＤＮＡ片段，并进行了序列分析。结果表明，牛ＣＤ１４基因的核苷酸在相同区域内与人ＣＤ１４的同源性为７９％，推导氨基酸序列的同源性为７３％；而与小白鼠的核苷酸和氨基酸的同源性分别为７５％和７１％。无论在核苷酸还是氨基酸水平上，牛ＣＤ１４基因与人ＣＤ１４的同源性都要高于与小白鼠的同源性。

摘要：目的动态测定单核细胞-血小板黏附（cd42a^＋／cd14^＋）、单核细胞活化功能（HLADR^＋／cd14^＋）以观察手术创伤后炎症反应和免疫功能，并评价其临床意义。方法设计自身前后对照试验，采集22例择期骨科手术患者血液，用流式细胞术测定其术前及术中、术后多个时点CIM2a^＋／cd14^＋和HLADR^＋／cd14^＋的表达，同时检测PLT和WBC计数；观察组术前1天与健康志愿者（20例）进行对照。结果与T1时刻比较，HLADR^＋／cd14^＋于T2时刻开始明显下降，于T4时刻至最低35．7±8．2，后逐渐回升（P〈0．01），差异有统计学意义（P〈0．05）；与T1时刻比较，cd42a^＋／cd14^＋于T2时刻均开始上升，于T4时刻至最高29．9±5．0，后逐渐下降（P〈0．01）；cd42a^＋／cd14^＋（％）与PLT、WBC均为正相关（r值分别为0．890和0．814），差异有统计学意义（P〈0．01）。与对照组比较，观察组术前1d各指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论HLADR^＋／cd14^＋、cd42a^＋／cd14^＋是反映术后免疫功能和炎症反应之早期的、灵敏的、可预见的指标。

摘要：针对人可溶性cd14 (scd14 )的cdNA序列设计引物 ,通过反转录PCR技术 ,从U93 7细胞中 ,扩增出编码人可溶性cd14的基因序列 ,并将其克隆至质粒pGEM T中 ,通过PCR、酶切及序列测定鉴定重组载体。结果表明获得了人可溶性cd14基因片段 ,为下一步进行cd14表达及生物学活性研究奠定了基础。