摘要：收稿日期:2021-11-23修回日期:2022-01-06作者简介:张瑞(1988-),男,安徽蚌埠人,硕士研究生在读,研究方向:生物工程:E-mail:634947112@qq:com。通信作者:李大力(1965-),男,江苏徐州人,副教授,研究方向:生物工程:E-mail:lidali@***。

摘要：目的:构建和表达抗血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)/抗cd3双特异单链抗体(bscVEGFR2×cd3),及亲和活性测定。方法:设计抗VEGFR2/抗cd3双特异单链抗体基因序列,由公司合成并亚克隆入真核表达载体pcdNA3.1(+)中,脂质体法转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),筛选高效分泌表达bscVEGFR2×cd3的克隆株。表达产物经Ni-NTA柱纯化,120 g/L SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定。应用流式细胞术(FCM)检测生物学活性。结果:bscVEGFR2×cd3重组表达载体测序证实序列正确。bscVEGFR2×cd3能够在CHO细胞中进行分泌表达,筛选出6株高表达克隆株。120 g/L SDS-PAGE显示相对分子质量(Mr)约56 000有1条带,与预期相符,Western blot证明anti-His抗体能与这条蛋白条带发生特异性结合。FCM检测bscVEGFR2×cd3能与cd3+jurkat细胞和VEGFR2+A375细胞特异性结合。结论:成功构建和表达抗VEGFR2/抗cd3双特异单链抗体,该抗体具有与VEGFR2、cd3特异性结合的免疫学活性。

摘要：目的:构建并表达抗人精浆蛋白/抗cd3的双特异性单链抗体(BsscFv),并检测其生物学活性。方法:利用重叠延伸拼接PCR,拼接抗人精浆蛋白scFv基因和抗cd3scFv基因,并在中间引入柔性短肽(GlySerGly)2,构建抗人精浆蛋白/抗cd3的BsscFv基因。测序正确后,将融合基因亚克隆入真核表达载体中,并在HeLa细胞中进行表达,采用流式细胞术(FCM)和51Cr释放试验,评价BsscFv的抗原结合活性和体外介导的特异性杀伤靶细胞的效应,以及利用裸鼠前列腺癌模型观察其在体内的抑瘤作用。结果:测序分析证实,Bss-cFv基因片段的大小为1.5kb,编码500个氨基酸,该序列与设计的完全一致。SDS-PAGE和Westernblot分析证明:表达产物存在于HeLa细胞的培养上清中,其相对分子质量(Mr)为61000。FCM结果显示:BsscFv可特异性的结合前列腺癌细胞LNCaP和cd3+淋巴瘤细胞Jurkat,结合率分别为54.1%和53.7%。体外实验表明,BsscFv可介导CTL对LNCaP细胞的杀伤。与对照组相比较,接种LNCaP的裸鼠在体内注射激活的CTL和BsscFv治疗后,肿瘤的生长明显受到抑制(P<0.05)。结论:抗人精浆蛋白/抗cd3的BsscFv具有一定的生物学活性,在体内、体外均可介导CTL杀伤靶细胞LNCaP。

摘要：法兰西，浪漫文化和艺术的发源之地。音响作为一个兼有技术和艺术成分的产业，自然也会深受其产地的文化氛围的影响。虽然目前国内市场上法国品牌的器材并不多，但每一样都凭着其独特的设计理念和纯美的音色给人留下深刻的印象。

摘要：设计并化学合成含有适当酶切位点及连接肽的寡核苷酸序列,与一定的背景载体连接并改造成适用于单链抗体表达的载体:外分泌型pWAI80和融合蛋白型pROH80从分泌抗人cd3单克隆抗体的杂交瘤细胞UCHT1中,经PCR扩增出轻、重链可变区基因V_H和V_K,并插入上述表达载体中构建成单链抗体基因.通过对鼠OKT3结合位点的结构模拟,并比较人、鼠抗体家族性保守序列,设计出改形OKT3的基因序列.化学法部分合成8个寡核苷酸片段,应用重叠PCR技术扩增出完整改形重链基因V_H,并克隆、酶切和测序鉴定.将所克隆V_H基因插入表达载体pCOMB3和 pGEX-4T-1中进行表达.经 IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和 Western blot分析以及 ELISA检测,结果发现分泌型表达产物及 M13基因Ⅲ-V_H改形单域抗体融合蛋白具有与cd3单抗竞争抑制的活性;而融合型单链抗体及改形单域抗体表达产物主要以包涵体形式存在,占细菌总蛋白的 30％左右.

摘要：目的:设计并制备抗GPC3/cd3双特异性重链抗体(BiHcAb),分析其与双特异性T细胞衔接子(BiTE)在体内外抗肿瘤活性的差异。方法:通过全基因合成抗GPC3和抗cd3单域抗体(sdAb)序列,克隆至携带IgG4 Fc段的表达载体中,同时利用KIH技术形成稳定的双特异性重链抗体。2种质粒共转染HEK-293F细胞,悬浮摇瓶培养获得目的抗体。SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色确定相对分子质量。通过流式细胞术检测与GPC3阳性肿瘤细胞和外周血单个核细胞(PBMC)的结合能力。通过共培养检测BiHcAb介导的细胞杀伤效果及细胞因子释放;采用裸鼠异体移植模型实验检测BiHcAb的体内抑制肿瘤活性。结果:成功构建并表达抗GPC3/cd3 BiHcAb,相对分子质量约为100000,BiTE相对分子质量约为50000。抗GPC3/cd3 BiHcAb较BiTE对表达GPC3的肿瘤细胞具有更强的杀伤活性,同时促进释放更多的细胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6),差异有统计学意义(P<0.05)。裸鼠体内实验显示抗GPC3/cd3 BiHcAb比BiTE具有更强的体内抑制肿瘤生长的作用,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功制备的抗GPC3/cd3 BiHcAb较BiTE在体内外具有更强的抗肝癌作用。

摘要：本文在已克隆抗人ＣＤ３抗体ＶＨ和Ｖｋ基因的基础上，设计并合成了ＰＣＲ引物。两个外侧引物分别含有ＥｃｏＲＩ和ＳａｌＩ酶切位点及起始码和终止码序列，４个内侧引物各含部分连接肽基因序列。用加端ＰＣＲ分别在ＶＨ基因３＇端和Ｖｋ基因５＇端延伸部分连接肽基因序列，回收后混合运火；应用重叠延伸拼接法，将ＶＨ和Ｖｋ基因通过Ｌｉｎｋｅｒ序列串联为单链抗体基因；利用ＰＣＲ产物两端预先设计的ＳａｌＩ和ＥｃｏＲＩ酶切位点，将其克隆到ｐＵＣ１９质粒中，筛选到阳性克隆。经双脱氧终止法序列测定：ＶＨ和ＶＫ基因及Ｌｉｎｋｅｒ序列均正确，为用基因工程技术生产单链抗体奠定了基础。

摘要：国外以真空管设计制作放大器的厂家很多，若要请资深音响迷随便举例，Audio Research绝对会是前几个被提到的品牌。Audio Research以制造真空管放大器闻名于全世界，不过在进入数字化时代之后，他们除了坚持真空管前后级放大器的设计生产之外，也开始尝试制造数字信号源。从最早的cd1到后来的cd2，都获得不错的评价，温润厚实的声音走向，更是让许多音响迷深爱不已。

摘要：山灵新推出发烧级cd播放机cd3．1，采用三洋HD870光头和飞利蒲SAA7824 cd伺服系统，使声音更加真实自然；面板与上盖板及两侧板采用全铝合金一体化设计，cd机芯装在厚达4．9mm的上盖板，能有效起到最大的避震作用，提高伺服系统的读取精度。