摘要：本研究旨在探讨cd44基因表达抑制对白血病多药耐药细胞株K562/A02耐药性及生物学活性的影响。根据cd44基因表达序列设计有效的RNA干扰片段,将其插入质粒表达载体中,获得针对cd44mRNA的特异性siRNA真核质粒(pGCsiRNA-cd44),转染K562/A02细胞。用实时荧光定量RT-PCR检测K562/A02细胞cd44、mdr-1和bcl-2mRNA的表达;用MTT法检测阿霉素对K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC50);流式细胞术(FACS)检测细胞周期;Hochest33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果表明:针对cd44基因的siRNA真核质粒可有效沉默K562/A02细胞的cd44基因:与对照组相比,转染了4条pGCsiRNA-cd44质粒的K562/A02细胞cd44表达均明显受抑,以转染了sicd44-1的细胞中抑制最强。转染pGCsiRNA-cd44质粒48小时后,K562/A02细胞cd44mRNA表达水平下降64.1%(p<0.05),同时mdr-1与bcl-2mRNA的表达量较对照组分别下降了25.6%与50.8%;K562/A02细胞IC50为(17.97±1.61)μg/ml,无义序列质粒转染后阿霉素对K562/A02细胞的IC50为(16.95±1.72)μg/ml,pGCsiRNA-cd44转染后IC50明显降低为(8.77±1.63)μg/ml(p<0.01)。转染48小时后,G0/G1期细胞比例提高了10.7%;细胞出现核固缩、核边集、凋亡小体等改变。结论:特异性cd44siRNA可显著抑制K562/A02细胞cd44基因的表达,抑制细胞增殖,诱导其凋亡,并有效逆转K562/A02细胞的多药耐药性。

摘要：目的:建立从膀胱癌尿液脱落细胞中提取RNA进行RT-PCR研究的实验方法.方法:从20例膀胱癌患者尿液脱落细胞中提取RNA,采用RT-PCR技术扩增癌细胞中cd_(44)基因V_6～V_(11)外显子序列.结果:18例尿液标本均可被扩增出所设计的相应片段,并经Southern印迹杂交证实.结论:临床上采用此技术可从分子水平上对大批膀胱癌患者的癌基因表达产物进行无创伤性检测;为深入研究膀胱癌的发病机制、生物学行为和探讨简便、有效的无创伤性检测方法奠定了实验基础.

摘要：目的:探讨黄芪建中汤对脾气虚证肺癌小鼠抑制肿瘤转移的作用机制。方法:苦寒泻下法建立小鼠脾气虚证Lewis肺癌模型,模型成功建立后,按实验设计方案处理各组小鼠,同时观察小鼠的整体情况。14 d后,眼球取血,检测血清木糖水平,28 d后,取胸腺、肺及肿瘤组织。分别称取每只小鼠胸腺重量、体重,计数肺转移结节数,计算胸腺指数,采用RT-PCR方法检测nm23、cd44的表达。结果:脾气虚小鼠的整体状况及免疫功能降低,高剂量黄芪建中汤可明显改善脾气虚证Lewis小鼠的整体情况,升高小鼠胸腺指数,结节数少于模型组;黄芪建中汤各剂量组均可下调cd44-mRNA的表达、上调nm23-mRNA的表达。结论:高剂量黄芪建中汤对脾气虚证肺癌小鼠肿瘤的转移具有一定的抑制作用能够,其机制可能与提高胸腺指数,下调cd44-mRNA及上调nm23的表达有关。