摘要：背景:鼻咽癌是我国南方重点防治的恶性肿瘤之一,探讨天然草本菊花活性成分在NPC化学预防的作用,对建立现代康复体系具有重要意义。目的:研究菊花活性成分倍半萜烯内酯(SLs)对人鼻咽癌细胞中线粒体功能和半胱天冬酶活化途径的影响。设计:完全随机对照分组设计。地点和对象:由中山大学公共卫生学院预防医学系完成,对象为低分化cne2细胞株。干预:对parthenolide(PN)进行剂量-反应和时间效应作用观察,采用噻唑蓝(MTT)颜色反应检测细胞线粒体功能,底物荧光光谱法测定细胞内caspase-9和-3活性,蛋白免疫印迹法检测线粒体内细胞色素C释放和caspase-3酶原降解片段;并应用特异性抑制剂进行细胞内cas-pase途径阻断实验。主要观察指标:细胞线粒体功能、细胞内caspase-9和caspase-3活性、线粒体细胞色素C的释放和caspase-3酶原的降解。结果:PN(1～100μmol/L)作用12h和24h后,MTT颜色反应抑制率随剂量显著增高,呈明显剂量依赖性(Pearson'sr=0.7322,0.7703,P<0.05),IC50分别为252.94μmol/L和49.63μmol/L;但caspase-9和-3活性未见升高,未见细胞色素C释放和caspase-3酶原降解片段形成。PN与caspase抑制剂联合作用后,caspase-9和-3活性明显低于对照和单独PN作用(t=9.146,8.280,27.325,27.450,P<0.05)。

摘要：目的:建立稳定沉默CUL5基因的cne2细胞系,探讨CUL5在连续分割照射下鼻咽癌细胞加速再增殖现象中所起的作用。方法:设计并合成能表达针对CUL5基因的shRNA的DNA序列,构建真核表达载体;脂质体转染重组质粒至人鼻咽癌细胞株cne2;G418筛选阳性细胞并扩大培养;RT-PCR检测连续分割照射前后阳性细胞CUL5基因沉默效果。结果:经限制性内切酶酶切和DNA测序证实质粒中插入的为所需序列;G418筛选所得阳性细胞经RT-PCR证实照射前后均能抑制CUL5基因表达。结论:成功建立CUL5基因沉默的cne2细胞系。

摘要：目的探讨慢病毒靶向沉默Bmi-1基因对鼻咽癌细胞cne2生物学行为的影响。方法设计3条Bmi-1shRNA干扰系列,构建慢病毒重组载体PLVx-shRNA2-Bmi-1,用重组载体转染293T细胞,收集上层病毒液浓缩、滴定。将cne2细胞随机分为5组,对照组不进行感染,shRNA1、2、3组分别感染表达shRNA1、2、3的慢病毒,空载体组感染空载的慢病毒。感染48 h,用RT-PCR及Western blotting法分别检测Bmi-1基因及蛋白的相对表达量,筛选沉默Bmi-1效率最佳的干扰序列。用平板克隆形成实验检测Bmi-1基因沉默后cne2细胞增殖能力,用流式细胞术检测细胞凋亡率和周期分布。结果插入的序列与设计的3条shRNA序列碱基排列一致,说明目的片段均已正确插入,PLVx-shRNA_2-Bmi-1慢病毒表达载体构建成功。与其他两组比较,Bmi-1-shRNA1、2、3组Bmi-1 mRNA及蛋白相对表达量低(P均<0.05),Bmi-1-shRNA3组最低(P均<0.05),沉默效率最佳。与空载体组比较,Bmi-1-shRNA3组增殖能力弱(P均<0.05),细胞凋亡率高(P均<0.05),Bmi-1-shRNA3组G1期细胞比例高、S期细胞比例低(P均<0.05)。结论沉默Bmi-1基因可抑制鼻咽癌cne2细胞增殖、促进其凋亡,并改变细胞周期。