摘要：为了控制延边地区气肿疽病的发病率,制备出有效的核酸疫苗,根据NCBI上气肿疽梭菌细胞毒素A(ccta)的基因序列设计出一对特异性引物。将PCR扩增的ccta基因克隆到pMD19-Tsimple载体,对测序正确的基因进行序列分析,再次克隆至pcDNA3.1-1真核表达载体,并且将其转染Vero细胞。结果表明,pcDNA3.1-ccta组通过转染后的细胞存在绿色荧光的现象,同时pcDNA3.1-ccta重组质粒表达的产物大小约19ku,说明Vero细胞中的pcDNA3.1-ccta质粒成功表达了ccta蛋白。

摘要：为了解气肿疽梭菌(Clostridium chauvoei)细胞毒素ccta的生物学功能,参照GenBank中ATCC 10092株序列设计特异性引物,试验采用PCR技术扩增获得ccta基因。通过生物信息学分析软件DNAStar、EXPASY、Signal P、NetPhos Server V.3.1等程序,对ccta基因进行序列分析,并对其编码蛋白质的结构和功能进行预测。结果表明:ccta基因编码317个氨基酸;ccta基因编码蛋白质是一种偏酸性、稳定、亲水性蛋白,无跨膜区域,但存在信号肽,含有4个N-糖基化位点,1个O-糖基化位点,以及多个磷酸化位点,其中二级结构为混合型,无规卷曲最多,有22个优势的B细胞抗原表位。说明ccta基因是气肿疽梭菌的重要毒力因子,为预防黑腿病疫苗的候选抗原,本试验成功克隆ccta基因,并分析了其编码蛋白的特性,为进一步研究气肿疽梭菌ccta基因功能及其重组蛋白提供参考。

摘要：为建立气肿疽梭菌(Clostridium chauvoei)的快速检测方法,根据Gen Bank中已发表的气肿疽梭菌ATCC10092细胞毒素Cct A基因序列(登陆号:JQ692583.1)设计了一对特异性引物,并以气肿疽梭菌标准株C54-1全基因组DNA为模板,对气肿疽梭菌细胞毒素Cct A基因进行PCR扩增,经过敏感性和特异性试验对该试验方法进行验证,并初步应用于临床检测。结果表明:建立的PCR检测方法具有快速、特异、敏感、高效等优点,与其他诊断方法相比更适用于气肿疽梭菌的诊断。