摘要：目的根据cdc42蛋白二级结构,设计cdc42 si RNA干扰片段,构建cdc42稳定干扰sh RNA载体。观察cdc42有效沉默对结直肠癌SW480细胞形态的影响。方法根据cdc42基因CDS区序列,设计4条si RNA片段。Western blot筛选最有效沉默片段,酶切插入真核表达载体,将构建的sh RNA质粒载体,瞬时转染结直肠癌SW480细胞,QPCR及Western blot验证cdc42沉默效率;观察转染前后,SW480细胞形态变化。结果 4条si RNA转染细胞后,验证结果显示si RNA-3沉默效率大于50%,沉默效果最好,将此片段插入真核表达载体,测序结果提示cdc42 sh RNA构建成功,转染SW480细胞后,cdc42基因m RNA及蛋白水平表达明显下降,差异有统计学意义;显微镜观察cdc42沉默后,SW480细胞周边伪足伸出减少,细胞变光滑,细胞整体体积明显减小。结论成功根据基因序列设计有效沉默片段,构建cdc42稳定沉默载体,证实cdc42沉默可以逆向改变结直肠癌细胞高侵袭性形态,为研究cdc42对结直肠癌的发生、发展提供分子工具。

摘要：目的:观察细胞分裂周期蛋白42(cdc42)在舌鳞癌中的表达及与临床病理特征和预后的关系,探讨体外沉默cdc42基因对舌鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮-间质转化(EMT)的影响及作用机制。方法:通过免疫组织化学法检测cdc42基因在舌鳞癌及癌旁组织中的表达,分析cdc42表达与舌鳞癌临床病理学参数的相关性及对预后的影响。将人舌鳞状细胞癌CAL27和SCC-4细胞随机分为3组,分别为cdc42-siRNA组、阴性对照组和空白对照组。设计并构建针对人cdc42基因序列的3条小干扰RNA(siRNA),应用脂质体介导转染方法分别将cdc42-siRNA和NCsiRNA转染至cdc42-siRNA组和阴性对照组,空白对照组仅加入转染试剂。通过实时荧光定量反转录PCR(qRTPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞cdc42的mRNA及蛋白表达,将沉默效率最高的cdc42-siRNA转染组作为后续实验组。Western blot检测EMT及MAPK JNK/p38通路相关蛋白的表达,CCK-8、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测各组细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果:cdc42在44例舌鳞癌患者中的阳性表达率为70.5%(31/44),在癌旁组织中的阳性率为38.6%(17/44),差异具有统计学意义(P0.05)。体外实验中,cdc42-siRNA组细胞cdc42 mRNA和蛋白表达显著下降(P0.05),而p-p38-MAPK、p-JNK蛋白表达水平显著下降(P<0.05),cdc42-siRNA组细胞增殖、侵袭和迁移能力显著下降(P<0.05)。结论:舌鳞癌患者中cdc42表达增加,并且其表达与颈淋巴结转移、临床分期及浸润深度相关。沉默cdc42可能通过阻断MAPK JNK/p38通路抑制舌鳞癌细胞EMT过程,进而抑制侵袭迁移,同时可负向调节舌鳞癌细胞增殖。

摘要：目的研究细胞周期分裂蛋白Cell divisioncy cle42(cdc42)小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌细胞恶性表型的影响.方法Western blot检测五种结肠癌细胞系中cdc42的表达。设计并合成靶向cdc42编码区的三对siRNA及阴性对照RNA,应用LipofectamineTM2000分别转染结肠癌细胞系中高表达cdc42的Lovo和SW620细胞,RT-PCR和Western-blot分别检测48h后cdc42mRNA及蛋白的表达。Cell Counting Kit-8检测细胞的增殖能力,损伤刮擦实验和Transwell小室法分别检测细胞迁移与侵袭能力的变化。结果RT-PCR和Western blot检测显示,cdc42-siRNA能显著下调cdc42mR-NA和蛋白水平,尤其cdc42-siRNA1;siRNA处理后的肿瘤细胞增殖受到抑制,细胞迁移、侵袭能力也显著降低。结论cdc42-siRNA可有效抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。提示cdc42可能成为抑制结肠癌细胞增殖和转移新的分子靶点。

摘要：目的观察细胞周期分裂蛋白Cell division cycle 42(cdc42)小干扰RNA(siRNA)对人乳腺癌细胞增殖的影响。方法设计并合成靶向cdc42编码区的siRNA,将其瞬时转染至MCF7细胞中。48 h后应用RT-PCR和Western-blot分别检测细胞转染siRNA后cdc42 mRNA及蛋白的表达。CCK8及饱和密度实验检测cdc42小干扰RNA对MCF7细胞增殖能力的影响。结果 RT-PCR和Western-blot检测显示cdc42-siRNA能显著下调MCF7细胞中cdc42 mRNA及其蛋白表达水平。cdc42-siRNA转染后MCF7细胞增殖能力受到明显抑制。结论 cdc42小干扰RNA可以有效抑制MCF7细胞的增殖能力,提示cdc42可能成为抑制乳腺癌MCF7细胞增殖的新靶点。

摘要：目的本文研究针对细胞周期分裂蛋白(cell division cycle 42,cdc42)小干扰RNA(siRNA)对人肺癌细胞增殖及EGFR蛋白表达的影响。方法设计并合成靶向cdc42编码区的siRNA及阴性对照,将其瞬时转染至A549细胞中。48h后应用RT-PCR和Western-blot分别检测细胞转染siRNA后cdc42 mRNA及蛋白的表达。CCK8实验检测细胞增殖能力的变化。同时检测EGFR蛋白表达情况。结果 RT-PCR和Western-blot检测显示cdc42-siRNA能显著下调A549细胞中cdc42 mRNA及其蛋白表达水平(P<0.01)。cdc42-siRNA转染后A549细胞增殖能力受到明显抑制(P<0.01),且EGFR蛋白表达表达水平显著降低(P<0.01)。结论 cdc42小干扰RNA可以有效抑制A549细胞的增殖,其机制可能与cdc42沉默导致EGFR表达下调有关,提示cdc42可能成为抑制肺癌A549细胞增殖的新靶点。