摘要：为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的core蛋白及其多克隆抗体,根据core蛋白的编码基因序列,设计合成一对特异性引物,利用RT-PCR扩增BVDV core基因并定向插入Pet30a载体中,构建重组质粒Pet30a-core,经酶切鉴定后转化大肠埃希菌TOP 10感受态细胞,筛选获得阳性重组菌,以IPTG进行诱导后成功表达出分子质量为20 ku的重组core蛋白。将诱导表达的蛋白产物经融合蛋白的Ni柱亲和法进行纯化,利用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,并利用间接ELISA法测出多克隆抗体效价达到1∶512000。蛋白质印迹法(Western blot)和间接免疫荧光试验(IFA)证实,多克隆抗体可与细胞中的BVDV抗原发生反应,具有良好的免疫原性和特异性。本实验成功制备了BVDV重组core蛋白的兔源多克隆抗体,为BVDV的检测及其core蛋白功能研究奠定了基础。

摘要：根据猪瘟病毒衣壳蛋白(core)基因序列设计一对特异性引物,RT-PCR从猪瘟兔化弱毒中扩增出完整的core基因,经酶切和序列测定后,克隆到携带His标签的原核表达载体p ColdⅠ中,成功构建了重组质粒p Cold-core,并转化到大肠杆菌Rosseta 2(R2)中;利用IPTG诱导表达目的蛋白并鉴定表达效果。结果表明:经终浓度为0.1 mmol/L IPTG诱导24 h后,core基因在R2中获得分泌性可溶表达,表达量占菌体蛋白的32.6%,SDS-PAGE显示目的蛋白相对分子质量为20 ku。Western blot结果显示core蛋白可以分别与His单抗和猪瘟病毒阳性抗血清发生特异性反应,均出现单一反应带。将目的蛋白切胶后免疫Balb/c小鼠,制备特异性抗血清,Western blot结果显示该抗血清与衣壳蛋白反应后有明显的特异性条带,经激光共聚焦鉴定抗血清能够与胞浆中的猪瘟病毒粒子发生反应。结果表明,core基因表达成功,制备的抗血清具有生物学功能。本研究为深入探讨core蛋白在猪瘟病毒致病机制上的作用奠定了基础。