摘要：2004年4月,将采自浙江省象山港海区网箱养殖的大黄鱼样本,提取总DNA,通过设计特异性引物对大黄鱼线粒体DNA(m tDNA)的辅酶5(ND5)和细胞色素b(cytb)基因进行PCR扩增。扩增产物经琼脂糖电泳检测、纯化后直接测序。得到ND5的序列1839 bp和cytb基因序列382 bp。应用prim er prem ier5和MEGA3软件包所作的系统发育分析表明:依据大黄鱼ND5序列所作的进化树总体支持传统的分类地位,大黄鱼更接近塘鳢鱼科。而基于cytb基因所作的分析表明,黑鳃梅童鱼是大黄鱼在石首鱼科中是遗传距离最小的。

摘要：建立了一种以线粒体细胞色素 b（Cyt b）基因为标靶，应用 PCR -RFLP 技术进行草鱼和青鱼种质鉴定的分析方法。设计一对引物 QYCYT -S 和 QYCTY -A 分别对青鱼和草鱼的 Cyt b 基因进行了 PCR 扩增，并选用 BglⅠ和 EcoRⅡ两种限制性内切酶对扩增产物进行酶切分析。结果表明，草鱼和青鱼都可以扩增出1111 bp 的条带，两种酶切检验发现，草鱼扩增产物能被 BglⅠ切成247 bp 和864 bp 两个片段，而青鱼的 PCR 产物能被 EcoRⅡ切成140 bp 和971 bp 两个片段，这表明，mtDNA Cyt b 基因 BglⅠ和EcoRⅡ的酶切位点都可作为鉴定青鱼和草鱼的有效分子标记。利用 PCR -RFLP 分析 mtDNA Cyt b 基因的方法操作简单，是一种快速鉴别草鱼和青鱼的可靠方法。

摘要：目的:以线粒体DNA上cytb为研究对象,采用聚合酶链式反应(PCR)手段,建立林蛙及林蛙油鉴定方法.方法:采用市售成年雌蛙的新鲜组织和林蛙油为实验材料,通过试剂盒提取总DNA;以已报道的东北林蛙、中国林蛙、黑斑蛙和蟾蜍的cytb为模板,设计四对引物; PCR扩增产物回收测序.结果:仅东北林蛙引物的PCR体系获得1 100 bp左右大小的产物,产物序列与东北林蛙cytb序列一致性为99%,说明实验对象林蛙为东北林蛙,林蛙油来源为东北林蛙.讨论:利用mt DNA独特的优势,应用PCR扩增cytb,并测序确定了林蛙品种,建立了林蛙种属以及林蛙油基源的鉴定方法,为林蛙油类药材的鉴定提供科学理论依据.

摘要：针对鳄鱼色素细胞b基因序列设计特异性引物,建立一种快速、特异、灵敏的鳄鱼源性成分检测方法。以常见羊肉、牛肉、猪肉、鸡肉、鸭肉、鱼肉、虾肉为参考动物物种作特异性检测,并经检出限和灵敏度实验验证其可行性。结果表明:该方法能够有效对鳄鱼源性成分进行快速检测,具有较强的特异性,鳄鱼组分DNA的检出限可达0.001 ng/μL,灵敏度可达0.01%。通过加工肉制品的检测验证,该方法拥有特异性强、灵敏度高的特点,可以用于加工肉制品中鳄鱼源性成分的检测。

摘要：对中药穿山甲及其混伪品进行分子鉴定研究,建立一个稳定、准确的位点特异性PCR鉴别体系。收集整理穿山甲属动物组织样本及NCBI序列,提取基因组总DNA,PCR扩增cytb和COⅠ序列并测序,通过Bio Edit软件进行序列比对,应用MEGA 6.0构建序列系统聚类树,并根据序列特异位点设计和筛选中华穿山甲特异性鉴别引物,并对PCR反应条件进行退火温度、DNA模板上样量和PCR循环数等条件的适应性考查。结果表明:cytb和COⅠ序列均能有效对穿山甲正、伪品进行聚类分析;在位点特异性PCR反应体系中,当退火温度为55~60℃,DNA模板量3~100 ng,PCR扩增35个循环时,基于COⅠ序列的引物COⅠ-S10/A5能使中华穿山甲扩增出约400 bp的特异性条带,而其他穿山甲品种扩增结果为阴性。该文基于COⅠ序列的引物COⅠ-S10/A5能实现中华穿山甲与伪品印度穿山甲、马来穿山甲、树穿山甲等的准确、稳定鉴别。

摘要：建立一种简便准确的蛇胆汁药材DNA分子鉴别方法。测试并优化胆汁药材基因组DNA提取方法,并针对蛇类的COⅠ,cytb,16S基因序列设计4对蛇类鉴别引物,根据特异性和扩增效率筛选最佳引物。使用其中1对引物cytb1,20种蛇胆汁DNA均能扩增得到约400 bp的条带,同样条件下7种其他动物胆汁DNA均无扩增条带。该方法特异性强,准确度高,重复性好,为加强控制蛇胆汁药材质量提供了有效方法。

摘要：目的:建立中药材三斑海马DNA指纹鉴定方法,研制三斑海马DNA检测试剂盒。方法:利用生物信息学对海马种属的cytb基因进行分析,以该基因作为靶基因,设计特异性引物,研制三斑海马DNA提取及PCR快速检测试剂,应用分子克隆及测序技术,克隆三斑海马阳性对照药材,并对快速检测试剂盒的特异性、稳定性、重复性及灵敏度进行考察,对市售三斑海马样品进行真伪鉴定。结果:基于cytb序列可对三斑海马及其混伪品进行区分。自主研发的三斑海马快速检测试剂提取的海马DNA纯度和浓度均可达到PCR的要求,在退火温度为61.5℃时引物特异性最强;克隆测序后三斑海马DNA序列与海马mtDNA cytb特异指纹区段序列一致;自主研制的试剂重现性、稳定性良好,检测浓度最低限为10^(-3)ng·μL^(-1);对17个市售样品进行检测,合格率为88.2%。结论:建立了一种特异、准确的检测中药材三斑海马DNA指纹鉴定方法;研制的三斑海马DNA检测试剂盒操作简便,灵敏度高,检测结果稳定。

摘要：目的探讨梅花鹿鞭及牛鞭线粒体细胞色素b(cytochrome b,cytb)基因特异性片段特征,建立梅花鹿鞭的DNA指纹鉴定方法。方法采用引物设计软件Primer Premier 5.0设计了用于鉴定梅花鹿鞭的特异性引物,用此引物对市售的梅花鹿鞭样本进行DNA指纹鉴定。结果梅花鹿鞭能扩增出306 bp大小的片段,而牛鞭未能扩增出相应片段。结论梅花鹿鞭DNA具有特异性指纹特征,所得梅花鹿鞭DNA指纹特征图谱可用于市售梅花鹿鞭的鉴定。

摘要：目的:利用cyt b基因设计分子探针并用于肉制品种属来源的鉴定。方法:对多种肉制食品进行总DNA提取,并基于cyt b基因设计的引物进行PCR扩增目的基因片段,测定cyt b基因片段的PCR扩增产物序列,使用BLAST搜索软件将其序列与Gen Bank中的同源序列进行比对分析。结果:采用设计的cyt b基因引物对我国10大类共计27种肉制品进行DNA扩增,均得到清晰单一的目的基因片段;测序及序列比对结果显示实验采用的cyt b基因作为分子标记得到的碱基序列,可以准确的实现物种鉴定。结论:实验中对肉制品种属来源的鉴定方法准确、简单、高效,适用于检测机构对肉制品种属来源的快速鉴定,并能为食品监管部门判定肉制品掺假造假提供有力的技术支持和依据。

摘要：为了给中国家驴遗传资源的评价、保护和利用提供一些分子生物学基础,本研究通过自行设计引物,采用PCR-SSCP技术对中国家驴线粒体DNA(Mitochondrial DNA,mtDNA)细胞色素b(Cytochrome b,cytb)基因308bp片段序列的变异进行检测来探讨其遗传多样性和母系起源。发现了3种基因型,结合GenBank已公布的数据进行分析发现在中国家驴品种中共存在15个突变位点,17个单倍型,通过计算各群体的遗传多样性指数发现中国家驴的遗传多样性比较丰富。另外,还通过与两种非洲野驴的cytb序列进行比对和网络聚类分析方法对所有家驴的样品进行了母系起源的研究,证明家驴起源于非洲的索马里驴和努比亚驴。