摘要：利用正交实验设计L25(56)对东亚砂藓(Racomitrium japonicum)ddrt-pcr反应体系的6因素(Mg2+、dNTP、锚定引物、随机引物、模板DNA、Taq酶)在5个水平上进行优化实验。结果筛选出各反应因素的最佳体系(20μL)为:Mg2+2.25mmol/L、dNTP0.4mmol/L、锚定引物1.0μmol/L、随机引物0.7μmol/L、模板DNA1.6μL、Taq酶2.5U。对东亚砂藓ddrt-pcr最佳反应体系进行梯度pcr引物退火温度筛选,得到的最佳退火温度为45.4℃。该优化体系的建立,为进一步进行东亚砂藓抗旱基因的筛选与克隆等一系列分子研究提供了重要参考依据。

摘要：以从小麦品种间杂交组合‘川35050／山农483’F7株系中分离出的感、抗小麦黄矮病的2个近等基因系为材料，利用ddrt—pcr技术和抗病基因保守结构域序列设计的7条简并或特异引物进行差异显示，pcr分析获得4条差异序列，并分别命名为：Rbdv1～Rbdv4（GenBank注册号：EU267934～EU267937）。以Rbdv1为靶序列，利用RACE对其3′末端进行pcr扩增，得到长778bp、末端有poly（A）尾巴的序列。用DNAMAN软件将3′RACE得到的序列与靶序列拼接得到1196bp长的片段，命名为A1（GenBank注册号：EU267938）。BlastN分析表明，A1与拟南芥、水稻中CDC48蛋白的同源性分别为81％和90％，其氨基酸序列中包含1个P—Loop，具有R基因的特征结构域，推测该片段很可能与抗小麦黄矮病基因相关。