摘要：背景:Delta-like4(dll4)是近年新发现的血管生长调控因子,研究表明抑制dll4可导致过度无效的血管生成。目的:研究RNA干扰抑制dll4基因表达对人血管内皮细胞增殖的影响。设计、时间及地点:随机分组,对比观察,于2007-07/2008-09在南昌大学医学院和江西省医学生物高技术重点实验室完成。材料:人微血管内皮细胞由上海细胞生物和生物化学研究所提供。方法:设计和化学合成靶向dll4基因的siRNA序列,lepofectamineTM2000介导dll4siRNA转染人微血管内皮细胞。提取细胞总RNA,进行反转录-聚合酶链反应扩增,琼脂糖电泳检测dll4mRNA。提取细胞总蛋白,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。采用四甲基偶氮唑盐法检测dll4siRNA对人微血管内皮细胞增殖的影响,实验分4组:①85nmol/Ldll4siRNA-duplex组。②85nmol/Ldll4siRNA-scrambled阴性对照组。③lepofectamine组。④未经处理组。主要观察指标:RNA干扰后,人微血管内皮细胞dll4的转录和蛋白表达及人微血管内皮细胞的增殖。结果:反转录-聚合酶链反应和Westernblot实验结果显示,人微血管内皮细胞转录dll4和表达dll4蛋白;85nmol/Ldll4siRNA完全抑制人微血管内皮细胞dll4转录和dll4蛋白的表达。dll4siRNA抑制人微血管内皮细胞dll4表达的有效浓度为85nmol/L。四甲基偶氮唑盐实验结果显示,85nmol/L dll4 siRNA-duplex组的细胞增殖率为190.00%,未经处理组的细胞增殖率为110.00%。结论:人微血管内皮细胞表达dll4,dll4siRNA抑制人微血管内皮细胞表达dll4并促进人微血管内皮细胞增殖,dll4对人微血管内皮细胞增殖具有抑制作用。

摘要：目的筛选dll4基因的特异性小干扰RNA(small interference RNA,siRNA),探讨dll4对A549细胞增殖、周期、凋亡的影响。方法设计、合成并筛选针对dll4的siRNA,转染A549细胞后,以RT-PCR和Western blot检测dll4 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖,激光扫描共聚焦显微镜检测细胞凋亡变化,流式细胞仪检测细胞周期改变。结果 dll4 siRNA能够明显下调A549细胞中dll4 mRNA和蛋白的表达。并能抑制细胞的增殖(抑制率为43.85%);促进细胞凋亡(P<0.05),G2/M期细胞比例明显增加(P<0.05)。结论 dll4在肺癌细胞中也有表达,下调其表达后,能够抑制肿瘤细胞增殖、促进其凋亡。

摘要：目的:探讨dll4基因在人结肠癌SW480细胞中的表达及利用RNAi技术对dll4基因表达的沉默作用,为临床基因治疗结直肠癌提供一个可选择的靶点和方法。方法:针对dll4基因的DNA设计具有特异性的SiRNA,经脂质体转染人结肠癌SW480细胞,采用免疫组化方法检测空脂质体组和转染组dll4基因表达有否阻断。结果:dll4在SW480细胞对照组和空脂质体组中高表达,转染后,dll4表达显著降低(P<0.05)。结论:RNAi技术能够有效抑制dll4基因的表达。

摘要：目的研究Delta-like ligand 4(dll4)与血管内皮生长因子(VEGF)在人肺腺癌A549细胞中的表达,以及dll4对VEGF表达的影响。方法 (1)用免疫组化检测dll4与VEGF在A549细胞中的表达;(2)设计和化学合成靶向dll4基因的小干扰RNA(siRNA)序列,用lipofectamineTM2000介导dll4 siRNA转染人A549细胞;(3)提取细胞总RNA,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增检测dll4、VEGF mRNA;(4)用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测A549细胞培养上清液中VEGF质量浓度。结果 (1)dll4、VEGF表达于A549细胞的细胞质内;(2)dll4 siRNA可使dll4沉默,同时,明显上调VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C mRNA表达,差异有统计学意义(P<0.05);(3)dll4转染后,细胞培养上清液中VEGF质量浓度明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论阻断A549细胞中Notch通路可刺激VEGF过表达。

摘要：目的:探讨利用RNA干扰沉默Delta样配体4(Delta-like ligand 4,dll4)对MCF-7细胞生长、凋亡的影响,为乳腺癌的基因治疗提供一个可选择的靶点和方法。方法:针对dll4基因的DNA设计具有特异性的SiRNA,经脂质体转染MCF-7,采用免疫组化方法检测空脂质体组和转染组dll4基因表达有否阻断。用MTT法测定MCF-7细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期改变。结果:构建dll4-SiR-NA表达载体能够有效抑制MCF-7中dll4的表达(P<0.05)。RNA干扰沉默dll4基因可抑制MCF-7细胞增殖,促进细胞凋亡,G2/M期细胞比例明显增加(P<0.05)。结论:RNAi技术能够有效抑制dll4基因的表达,抑制dll4基因的表达可抑制MCF-7细胞增殖,促进MCF-7细胞凋亡。

摘要：目的 Delta-like 4(dll4)是Notch信号通路的配体之一,是近年新发现的血管生长调控因子,研究表明dll4的高表达与肺腺癌转移预后密切相关。该文旨在研究dll4在A549细胞中的表达,以及dll4基因表达对人A549细胞增殖与凋亡的影响。方法 (1)体外培养A549细胞,免疫细胞化学法检测dll4在A549细胞中的表达及定位;(2)设计并化学合成靶向dll4基因的siRNA序列,lipofectamineTM2000介导dll4 siRNA转染A549细胞,RT-PCR进行dll4-mRNA定量,Western blot分别检测A549细胞dll4蛋白的改变;(3)四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞的存活和生长变化;(4)激光共聚焦显微镜检测Annexin V-FITC标记的A549细胞的细胞凋亡比率。结果 (1)A549细胞表达dll4蛋白,且定位于胞浆中;(2)dll4-mRNA和dll4蛋白的表达在对照组与干扰组之间有显著差异(P<0.05);(3)MTT检测显示抑制dll4表达对A549细胞的增殖有抑制作用,dll4干扰组细胞增殖抑制率为43.85%,未处理组细胞增殖抑制率为23.81%;(4)抑制dll4基因表达,A549细胞的凋亡比率明显升高,dll4干扰组细胞凋亡率为(25.01±4.32)%,未处理组细胞凋亡率为(14.24±0.98)%。结论 dll4在A549细胞表达。特异性阻断dll4/Notch信号途径能有效抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡。

摘要：OncoMed公司报告登西珠单抗（demcizumab，anti—dll4，OMP-21M18）伍用白蛋白紫杉醇和吉西他滨（gemcitabine）治疗转移性胰腺癌的Ⅱ期临床YOSEMITE试验头条结果，未能达到主终点。Ⅱ期临床试验设计测定该药加标准化疗治疗转移性胰腺癌的疗效和安全性。主终点是无病情加重存活，次终点是总存活。