摘要：生物体的性状由遗传物质dna中腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和鸟嘌呤(G)四种碱基的排列组合所编码。在细胞分裂过程中,dna复制不可避免地会产生错误,使得碱基排列组合可能发生改变,从而产生遗传物质变异。基因组编辑技术能够在海量的遗传密码中进行精准搜索,并靶向创制出预期的基因组变异,使人类开始拥有改造和设计生命体的能力。

摘要：目的 探讨ADP-核糖焦磷酸酶NUDT9促进肿瘤增殖的分子机制。方法 分析GEPIA2数据库中NUDT9在多种肿瘤中的表达水平;利用Western Blot免疫印迹法检测蛋白表达水平;通过克隆形成数量检测细胞增殖速度;使用流式细胞术检测细胞周期变化;EdU染色实验检测S期细胞比例;转染外源质粒SFB-NUDT9联合免疫共沉淀法和定量质谱技术鉴定NUDT9的相互作用蛋白;分别设计两条sgRNA和siRNA在肿瘤细胞中沉默NUDT9基因的表达,结合免疫印迹法检测NUDT9蛋白表达水平及其对细胞增殖相关蛋白表达水平的影响。结果 GEPIA2数据库显示NUDT9在多种肿瘤细胞中高表达;利用CRISPR和小干扰RNA技术均有效沉默NUDT9基因的表达;克隆形成、流式细胞术及EdU增殖实验均表明敲低NUDT9后抑制癌细胞的增殖及G1/S期转换;转染外源质粒SFB-NUDT9结合免疫沉淀法和定量质谱技术鉴定出与细胞增殖相关的NUDT9互作蛋白MCM2-7;通过转染siRNA沉默NUDT9再结合免疫印迹法,发现NUDT9的敲低影响MCM复合物中MCM3的蛋白表达水平;最后转染siRNA沉默MCM3基因的表达,克隆形成和EdU增殖实验均显示MCM3的敲低影响肿瘤细胞的增殖,S期细胞比例减少。结论 NUDT9通过调控MCM3的蛋白表达,促进S期细胞周期进程,对肿瘤细胞的增殖过程起到非常重要的作用。

摘要：RecQ解旋酶是dna解旋酶中的一个家族,从细菌到人类均具有高度保守性.人类RecQ解旋酶有:RecQ1、BLM、WRN、RecQ4和RecQ5五种.RecQ解旋酶的缺陷易患相关遗传病和各种癌症.RecQ解旋酶作为一种分子发动机,将ATP水解产生的化学能量转化成机械能,以"蠕动"和"滚动"两种模式沿dna分子运动,解开双链dna,通过复制、转录和翻译指导蛋白质合成.RecQ解旋酶在dna复制、修复、重组、转录、端粒维持等细胞代谢过程中具有非常重要的作用.项目总体思路是弄清RecQ解旋酶结构与功能及其相互关系,为靶标新药的设计治疗提供科学理论基础.研究内容包括:①解旋酶活性检测新方法的建立;②大肠杆菌RecQ解旋酶结构与功能关系研究;③人BLM解旋酶重要结构域及其功能研究;④RecQdna解旋酶动力学研究.

摘要：目的观察敲低Geminin对人脑胶质瘤细胞放疗敏感性的影响。方法利用GEPIA和CGGA数据库分析Geminin在脑胶质瘤组织中的表达及与生存期的相关性。实验分为两组:si-GL2组(对照组)和si-Gem组(干扰组),设计siRNA干扰序列(si-Gem)和阴性对照序列(si-GL2),分别转染脑胶质瘤细胞LN229和U87,qRT-PCR和Western blot检测转染效率及蛋白表达水平。流式细胞术检测碘化丙啶(PI)染色后dna含量分布,进而分析敲低Geminin对dna再复制的影响。通过AnnexinⅤ-FITC/PI法,用流式细胞术检测敲低Geminin对细胞凋亡的影响。CCK-8细胞增殖实验检测敲低Geminin对胶质瘤细胞LN229和U87放疗敏感性的影响。Western blot检测Geminin相关分子Cdt1和dna相关损伤蛋白γ-H2AX的表达水平。结果脑胶质瘤组织中Geminin的表达水平高于癌旁正常组织,且Geminin表达越高,脑胶质瘤患者预后越差(P<0.05)。与si-GL2组相比,si-Gem组Geminin在LN229和U87细胞中的表达降低(P<0.05)。与si-GL2组相比,si-Gem组敲低Geminin可诱导脑胶质瘤细胞出现dna再复制表型、细胞凋亡比例显著增加(P<0.05),脑胶质瘤细胞对放疗敏感性增强(P<0.05)。与si-GL2组相比,si-Gem组Geminin相关分子Cdt1蛋白表达水平降低,γ-H2AX的蛋白表达水平升高。结论敲低Geminin可以诱导脑胶质瘤细胞出现dna再复制表型,造成dna复制压力,并引起自发性细胞周期阻滞及细胞凋亡增多,进而增强脑胶质瘤细胞放疗敏感性,Geminin有望成为脑胶质瘤治疗的新靶点。