摘要：dna分子复制需要引物,体内dna分子复制需要RNA作为引物,复制结束后将引物切除,并通过相关酶补齐引物切除后留下的空隙;dna体外扩增时需要dna引物,复制结束时不需要切除引物,但对dna引物设计和合成提出了较高的要求。

摘要：目的:了解因某些microRNA(miRNA)家族成员序列相似,以及同一种成熟miRNA的长度不均一对PCR定量检测结果的影响,寻找区分相似miRNA成员和准确定量的方法和条件。方法:采用RNA加尾和引物延伸实时定量RT-PCR法,设计不同位置错配的引物,以克隆到质粒中的全长成熟miRNA为模板,比较在不同退火温度下各种错配引物与完全匹配引物在扩增miRNA上的效率差异,并根据由此得出的经验设计let-7家族成员引物,以克隆的成熟miRNA为模板,检测其在不同退火温度下区分相似家族成员的能力。此外,设计了10组3′末端碱基位置不同的特异引物,比较了它们在检测小鼠大脑miRNA表达水平上的差异。结果:提高退火温度12℃～14℃将最大限度增加特异性而不降低敏感性,将引物的3′末端置于差异碱基或其附近可以有效区分相似miRNA序列,将引物3′末端置于miRNA第18～20个碱基,可避免漏检较短的成熟miRNA,使定量更真实准确。结论:精心设计引物并提高退火温度可提高实时定量PCR检测microRNA的特异性和准确性。

摘要：目的试图比较简并引物扩增ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＮＳ３变异较大的区域的作用。方法设计了简并引物和减温（ｔｏｕｃｈｄｏｗｎ）ＰＣＲ扩增程序以对目的基因进行扩增，并对阳性ＰＣＲ产物进行克隆及测序。结果该方法能够检测基因变异约达２１％的区域。结论提示该法是一项有效的了解基因家系的技术。

摘要：目的:探讨等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条用于登革热病毒(DENV)快速检测的可行性。方法:采用磁珠富集法提取病毒总RNA,并逆转录为cdna用于等温链置换扩增检测体系;等温链置换扩增用于检测DENV,琼脂糖凝胶电泳用于分析等温链置换扩增产物及其检测的敏感度;采用柠檬酸三钠还原法制备用于试纸条的纳米金颗粒;利用核酸碱基互补配对原理设计纳米金测流层析试纸条的检测线与控制线,建立DENV的检测体系。结果:等温链置换扩增的敏感度为10 fmol/L。基于等温链置换扩增的纳米金测流层析试纸条检测DENV的敏感度也为10 fmol/L,取其检测样品浓度的对数值进行线性分析,检测浓度范围为10～10^(12)fmol/L,符合线性回归方程,线性相关系数(R^2)为0. 98。基于等温链置换扩增的纳米金测流层析试纸条检测DENV的特异性较高,与其他对照组无交叉。结论:建立了基于等温链置换扩增反应的纳米金试纸条用于DENV的检测方法,检测结果肉眼可见,敏感度高,可用于DENV的快速检测。

摘要：目的建立快速、高通量的基因悬浮芯片检测方法，用于生物恐怖病原体的快速筛检。方法选择保守的细菌16S rdna序列，并针对炭疽芽孢杆菌（Bacillus anthracis，B．a）、鼠疫耶尔森菌（Yersinia pestis，Y.p）、布鲁菌属（Brucella spp.，Bru）、土拉弗朗西斯菌（Francisella tularensis，F.t）和类鼻疽伯克霍尔德菌（Burkholderia pseudomallei，B．P）等5种生物恐怖细菌设计种（属）特异性探针，经16S rdna通用引物341A、519B扩增基因组dna，用基因悬浮芯片方法进行检测，并对方法的灵敏度、特异度、重复性、检测能力进行验证。结果经16S rdna通用引物扩增，特异性探针杂交检测，能将样本细菌鉴定到属水平，同属菌出现交叉反应；检出限分别为类鼻疽伯克霍尔德菌1．5pg／μl，布鲁菌属20pg／μl，炭疽芽孢杆菌7pg／μl，土拉弗朗西斯菌0．1pg／μl，鼠疫耶尔森菌1．1pg／μl；15次重复检测各探针变异系数（CV）为5．18％～17．88％，具有较好的重复性；方法可正确检出模拟白色粉末样本中炭疽芽孢杆菌和鼠疫耶尔森菌。结论建立了通用型基因悬浮芯片检测体系快速高通量筛查生物恐怖细菌的方法。

摘要：目的建立改进的四引物扩增受阻突变体系PCR（T－ARMS－PCR）检测方法，实现单管一次性检测叶酸代谢过程相关的4个单核苷酸多态性（SNP）位点：rs1801133，rs1801131，rs1805087和rs1801394。方法方法学建立。于2017年1至4月在河北省儿童医院检验科收集150名体检儿童抗凝全血标本以待验证。利用T－ARMS－PCR原理及多重嵌合引物策略设计rs1801133、rs1801131、rs1805087及rs1801394的特异性内外嵌合引物。通过优化引物浓度和反应条件，经单管PCR反应，结合QIAxcel毛细管电泳分析扩增产物长度，判读150份标本的SNP基因型，同时所有标本经测序法进一步验证。利用SPSS 17.0统计软件卡方检验对150份标本的4个SNP位点分别进行哈迪－温伯格遗传平衡（HWE）检测。结果改进的T－ARMS－PCR结合毛细管电泳分析的方法可在3 h内一次性识别本研究中叶酸代谢过程相关的4个SNP位点的8个不同等位基因，可对150份全血标本的SNP位点准确分型，其分型结果与测序法完全相符。4个SNP位点基因型的分布均符合HWE平衡定律（χ^2rs1801133＝0.69, Prs1801133＝0.40; χ^2rs1801131＝0.21, Prs1801131＝0.64; χ^2rs1805087＝3.32, Prs1805087＝0.07; χ^2rs1801394＝1.91, Prs1801394＝0.17）。结论本研究建立的改进的T－ARMS－PCR结合毛细管电泳分析方法，可准确地同时检测叶酸代谢过程相关的4个SNP位点，为指导人群特异性地补充叶酸提供了一种可能的技术手段。

摘要：目的利用多重荧光PCR技术，建立一种快速、准确、特异的检测常见分枝杆菌的方法。方法以分枝杆菌16SrRNA作为检测靶基因，设计双启动寡核苷酸（DPO）引物和TaqMan探针，探针的5’端分别用FAM、ROX、HEX和JOE进行荧光标记，3’端标记淬灭荧光。通过对4种分枝杆菌标准株基因组dna的扩增，评价多重荧光PCR方法的特异性和灵敏度。采用建立的多重荧光PCR方法，采用该方法检测2010年6至12月杭州市红十字会医院68例结核科住院患者清晨痰液标本，结果与细菌培养和抗酸染色镜检进行比较。采用，检验比较3种方法的阳性率。结果该方法可准确、特异地鉴定结核分枝杆菌和3种常见非结核分枝杆菌，检测灵敏度均为1×10^cfu／ml。对68份痰液标本进行检测，结果显示31份检测结果阳性，阳性率45．6％，明显高于涂片染色镜检（阳性率14．7％），差异具有统计学意义（x2=15．4，P〈0．05），其中28例为结核分枝杆菌，1例为鸟分枝杆菌，2例为胞内分枝杆菌，与细菌培养鉴定方法一致。1例培养阳性而PCR检测结果阴性标本经16SrRNA扩增测序鉴定为龟分枝杆菌。结论本研究建立的多重荧光PCR方法敏感、特异、快速，能有效检测结核分枝杆菌和常见非结核分枝杆菌，可用于分枝杆菌感染者的实验室快速诊断。

摘要：目的研究申克孢子丝菌的种特异性引物聚合酶链反应鉴定方法,从而为临床孢子丝菌病的分子诊断奠定基础。方法采用根据申克孢子丝菌几丁质合成酶基因1序列设计合成的一对寡核苷酸引物,分别对26株申克孢子丝菌(包括1株标准株,7株实验室保存株,18株临床分离株)及6种6株普通真菌(分属于3个菌属)的基因组dna进行PCR扩增。结果扩增产物选择性的从26株申克孢子丝菌基因组dna中获得,而对念珠菌属、毛癣菌属、小孢子菌属的6株普通真菌基因组dna均为阴性。结论采用以申克孢子丝菌几丁质合成酶基因1序列为基础的聚合酶链反应法鉴定申克孢子丝菌特异、简便、快捷,可用于临床诊断。

摘要：目的研究申克孢子丝菌dna提取方法;探索申克孢子丝茵的种特异性引物,运用聚合酶链反应方法鉴定申克孢子丝菌;从而为临床孢子丝茵病的分子诊断奠定基础。方法用Viscozyme L酶替代液氮研磨破壁提取孢子丝菌的基因组dna;根据申克孢子丝茵钙调蛋白基因序列设计一对寡核苷酸引物,分别对52株申克孢子丝菌及3种6株普通真茵的基因组dna进行PCR扩增。结果用Viscozyme L酶替代液氮研磨破壁成功提取出孢子丝菌的基因组dna。特异性引物对52株申克孢子丝菌可扩增出一条约430 bp的片段,而对念珠菌、曲霉、黑霉基因组dna扩增结果均为阴性。结论用Viscozyme L酶替代液氮研磨破壁提取孢子丝菌基因组dna与传统的CTAB法相比不仅操作更简便,而且避免了液氮研磨过程中难于避免的污染。运用我们所设计的特异性引物,结合PCR方法对申克孢子丝菌进行分子鉴定,结果显示不仅该引物对申克孢子丝菌特异、敏感而且该方法简便、快捷;可用于申克孢子丝菌病的临床诊断。

摘要：目的 :研究RHD基因结构 ,重点检测启动子区 ,探究RHD基因的表达机制 .方法 :采用PCR SSP方法 ,设计 3对序列特异性引物 ,对 6 0例无血源关系RhD(+)汉族人样本、98例无血源关系RhD(- )汉族人样本和 2例弱D型汉族人样本RHD基因启动子区约 10 0 0bp范围内的 4个RHD基因特异性多态性位点进行检测 .结果 :RhD表型 (- ) /RHD基因型 (- )个体启动子区全缺失 ,表型RhD阴性基因型为部分缺失或不缺失型个体启动子区都不缺失 .结论 :RhD表型 (- ) /RHD基因型 (- )个体符合RhD阴性的普遍机制 ,表型RhD阴性基因型为部分缺失或不缺失型个体存在另一种RhD阴性机制 .