摘要：利用一种快速玉米基因组dna提取方法,分别对Bt11、MON810、NK603、MIR604和TC1507这5种转基因玉米种子的胚和胚乳进行dna提取。根据不同转基因玉米重组结构点,分别设计特异性引物,参考农业部转基因检测标准,通过对PCR体系的优化整合后发现,该玉米dna快速提起法获得的PCR检测结果准确、可靠,在此基础之上建立一套多重PCR,使转基因检测的效率得到很大提高。

摘要：目的建立一种食源有害微生物快速检测体系。方法以致泻大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌5种有害菌为检测对象,以30 s快速提取基因组dna及多重PCR的试验技术进行了研究。结果筛选出特异性引物8对;发现致泻大肠埃希氏菌与单核细胞增生李斯特氏菌能够进行dna快速提取PCR检测;构建了致泻大肠埃希氏菌与单核细胞增生李斯特氏菌dna快速提取多重PCR检测体系,筛选出多重PCR成功的引物组合4对:rfbE/Hly、fbE/HlyA1、rfbE/HlyA2和eaeA/HlyA2,并对试验体系进行了优化。结论利用dna快速提取多重PCR检测某些食源有害微生物是可行的。但是,针对具体情况采取措施优化反应十分必要,针对多重PCR设计相应引物,可能是优化关键。

摘要：目的:采用机械法破碎细胞壁释放dna,以达到快速用于PCR的目的。方法:用全自动研磨仪破碎细胞,设计16个频率和时间的组合,探究不同研磨频率和研磨时间的组合对dna提取的影响,并将每个组合提取的dna进行PCR。同时,利用研磨仪结合液氮进行研磨,以此来提取完整的基因组dna。结果:不同的研磨频率和研磨时间的组合提取的dna经PCR扩增后,均能得到目的条带。综合考虑选出dna快速提取的最佳组合为研磨频率60 Hz,研磨2 min。直接研磨不能提取出完整的基因组dna,若利用研磨仪结合液氮进行研磨,则可以快速提取出完整的基因组dna,研磨条件为40 Hz,研磨2 min。在茂源链霉菌、三角褐指藻和酿酒酵母中利用研磨仪研磨法快速提取的dna均实现了目的片段的扩增,最后用该方法提取的dna在茂源链霉菌中实现了4023 bp较大片段的扩增。结论:建立了快速提取dna用于PCR的方法,该方法在茂源链霉菌、三角褐指藻和酿酒酵母中均取得成功,证明该方法具有普遍的适用性,该方法提取的dna也适用于较大目的片段的PCR实验。