摘要：dna片段扩增和琼脂糖凝胶电泳检测是化学生物学的一个重要专业综合实验,旨在培养学生的综合实验技能并拓展科学思维。通常情况下,该实验利用聚合酶链式反应(PCR)进行dna片段的扩增,但PCR仪器和试剂较为昂贵,大幅增加了实验成本。此外,PCR操作的技术性较强,操作繁琐并涉及到多种微量试剂的移取,实验误差较大导致难以得到令人满意的实验结果。针对上述问题,该文提出利用杂交链式反应(HCR)代替PCR法进行dna片段的扩增,该方法为无酶等温核酸扩增技术,简单、温和且不需要昂贵的设备。此外,通过指导学生进行dna序列的设计,可以加深对HCR原理、碱基互补配对原则的理解和应用。基于HCR的dna片段扩增避免了昂贵仪器和试剂的使用,降低了实验成本,简化了实验操作,提高了实验的成功率。

摘要：目的:探讨分析依赖热稳定解旋酶dna恒温扩增技术检测烟曲霉;方法:将烟曲霉基因作为目的片段,以此设计特异度引物,并且在恒温条件下建立快速检测烟曲霉依赖热稳定解旋酶dna恒温扩增技术,进行特异度和灵敏度实验,并与普通聚合酶链式反应(PCR)方法进行比较。结果:热稳定的依赖解旋酶恒温核酸扩增(tHDA)产物序列与Ensembl Fungi数据库的序列相似率高达95%;在特异度检测中,黄曲霉的电泳结果为阳性,在100 bp处能够观察到清晰的条带;在灵敏度检测中,不同稀释浓度均能够明显观察到条带;结论:烟曲霉的tHDA检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求低,普通水浴槽即可进行反应。

摘要：本实验探讨了干血纸片直接用于PCR扩增方法的建立及其反应条件的优化，使其在临床及实验研究中具有更广泛的应用前景。1材料与方法1.1材料1.1.1干血纸片的制备取耳垂血、手指血或直接抽取的静脉血滴于国产新华滤纸上，室温下自然晾干后，-20℃可保存一月以上。1.1.2主要试剂Taqdna聚合酶购自加拿大Biostar公司,dNTP购自Pharmacia公司，dna分子质量标准PGEM-7Zf(＋)HaeⅢ购自华美生物工程公司。1.1.3PCR引物根据文献[1]，设计人胰岛素受体基因第17外显子引物，扩增长度为249bp。引物由中科院上海细胞所合成，序列如下:

摘要：为了建立一种新型、高效的活菌检测技术,以细菌酯酶代谢活性为判断依据,设计合成了一种新型噻唑橙荧光染料——TOMA,其结构经核磁共振谱、高分辨质谱确证.对TOMA的细胞膜穿透性、酯酶敏感性及对dna的PCR扩增的抑制作用3方面特性进行了初步验证.结果显示:10 mg/L的TOMA于室温、黑暗条件下与活的大肠杆菌(Escherichia coli)O157:H7混合孵育10 min后菌体发出强烈荧光,表明该分子能有效穿透细菌壁膜,并与核酸有良好的结合能力;用固定化脂肪酶对TOMA进行体外水解,水解率达83%,说明该分子的酯键能在相关酶作用下断裂;TOMA与实时荧光定量PCR联用时,该分子对细菌dna扩增具有明显的抑制作用.以上结果证明TOMA分子设计基本达到预期目的.

摘要：目的　建立SNaPshot技术对乙型肝炎病毒(HBV)基因组P基因区单核苷酸多态性(SNP)的分析。方法　针对HBVYMDD变异位置的上、下游设计引物,用PCR方法进行dna扩增,产物直接测序或克隆测序。再针对变异位点74 1A G变异型(YVDD)和74 3G T变异型(YIDD)的紧邻上游设计高度特异的SNaPshot检测引物,用不同荧光标记的ddNTP对PCR产物进行一步延伸,然后置于310型dna测序仪上观察荧光信号,可直观的检测上述两位点的单核苷酸多态性。结果　在拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者中,经测序证实P基因区不仅存在74 1、74 3位点的变异,还存在5 14C A、5 2 3C A、5 6 2T A、6 6 7C A等位点的变异。对已证实P基因区变异的13例患者血清用SNaPshot技术检测YMDD结果与测序结果完全相同,显示SNaPshot技术高度的特异性。结论　SNaPshot技术检测HBV基因组SNPs具有快速、简便、准确特异的特点,还检测到野生株和变异株的混合存在。

摘要：目的　用基因芯片对HLA DR5 2组快速分型。方法　根据中国汉族人群常见的HLA DRB位点及其基因多态性的独特序列 ,设计特异性的寡核苷酸分型探针 ,制成寡核苷酸芯片。通过组间特异引物扩增基因组dna ,扩增中用荧光标记 ,扩增标记后的产物与芯片的探针杂交 ,通过杂交产生的荧光信号确定样品的基因亚型。 83份样本分别用基因分型芯片和序列特异性引物聚合酶链反应技术 (PCR SSP)对HLA DR5 2组分型。结果　PCR SSP分型DR5 2组 5 7个位点中 ,经芯片分型有 2个无DR5 2组位点 ,3个PCR SSP分型为DR5 2组纯合子 ,芯片为DR5 2组杂合子 ,1个PCR SSP分型为非DR5 2组纯合子 ,芯片分型为含有 1个DR5 2组位点的杂合子。结论　基因芯片能对HLA DR5 2组快速、准确的分型 ,比PCR SSP能更多的检出DR5 2组位点 ,特别是能将纯合子进一步分型 ,适合临床应用。

摘要：橡胶树(Hevea brasiliensis ***).的传统种植区主要分布于高温多雨的热带地区,抗旱基因或dna标记的筛选鉴定对于橡胶耐旱品系的选育及橡胶树向温光和雨量相对不足的非传统植胶区的拓展具有十分重要的意义。RAPD分析是目前遗传多态性研究及特异性基因片段鉴定最有效的分子学工具之一。本研究借助聚合酶链式反应(PCR)对来自37个橡胶无性系的基因组dnas进行了RAPD分析。结果显示,多态性及特异性扩增条带的数量随无性系及引物的不同而有所差异,有些扩增带为一些无性系共有,而另一些则仅存在于个别或少数无性系之中。根据引物OPB-12的两个特异性扩增条带(1.2和1.4kb)在各无性系中单独或同时存在与否,我们鉴定出了两个相应的特异性RAPD标记,其中1.4kb扩增带尤其引人注目。克隆及测序结果表明,该RAPD片段与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)脯氨酸特异性通透酶基因存在一定程度同源性。针对该片段设计一对特异性引物并再次对基因组dna进行更严格条件下的PCR扩增,结果从14个参试无性系中获得了该1.4kb条带。这种由RAPD标记通过特异性引物设计转化得到的SCAR(序列特异性扩增区)标记可用于橡胶树优良或特异性基因的筛选及鉴定。

摘要：目的：建立快速简便的聚合酶链反应(PCR)方法检测入巨细胞病毒(HCMV—dna)。方法：根据国外文献报道的HCMV基因序列，利用计算机辅助设计并选出一对寡核苷酸引物，扩增片段为370hp。结果：在370bp处出现dna扩增带者为HCMV—dna阳性。结论：PCR技术检测HCMV—dna敏感、特异，有望应用于临床作为HCMV感染的早期诊断方法。

摘要：橡胶树（Hevea brasiliensis ***．）的传统种植区主要分布于高温多雨的热带地区，抗旱基因或dna标记的筛选鉴定对于橡胶耐旱品系的选育及橡胶树向温光和雨量相对不足的非传统植胶区的拓展具有十分重要的意义。RAPD分析是目前遗传多态性研究及特异性基因片段鉴定最有效的分子学工具之一。本研究借助聚合酶链式反应（PCR）对来自37个橡胶无性系的基因组dnas进行了RAPD分析。结果显示，多态性及特异性扩增条带的数量随无性系及引物的不同而有所差异，有些扩增带为一些无性系共有，而另一些则仅存在于个别或少数无性系之中。根据引物OPB-12的两个特异性扩增条带（1．2和1．4kb）在各无性系中单独或同时存在与否，我们鉴定出了两个相应的特异性RAPD标记，其中1．4kb扩增带尤其引人注目。克隆及测序结果表明，该RAPD片段与酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）脯氨酸特异性通透酶基因存在一定程度同源性。针对该片段设计一对特异性引物并再次对基因组dna进行更严格条件下的PCR扩增，结果从14个参试无性系中获得了该1．4kb条带。这种由RAPD标记通过特异性引物设计转化得到的SCAR（序列特异性扩增区）标记可用于橡胶树优良或特异性甚丙的筛诜强鉴帝。

摘要：目的 :比较细菌dna4种提取方法的优缺点。方法 :采用水煮法、传统法、GenmictiondnaKit法、E .ZNA法分别制备 18种细菌dna ,比较 4种方法提取dna纯度及量的差异。结果 :4种方法制备的dna均可成功应用于PCR扩增 ,水煮法与E .ZNA法提取dna量都较大 ,但前者纯度低于后者 ;GenmictiondnaKit法提取dna纯度高 ,但量较低 ;传统法提取的dna量及纯度均较低 ,但经济、可靠。结论 :4种方法各具特点 ,应根据实验目的选用。