摘要：研究用 ＲＡＰＤ技术对条斑紫菜（Ｐｏｒｐｈｙｒａ　ｙｅｚｏｅｎｓｉｓ）、坛紫菜（Ｐ． Ｈａｉｔａｎｅｎｓｉｓ）。半叶紫菜（Ｐ．Ｋａｔａｄａｉ ｖａｒ． Ｈｅｍｉｐｈｙｌｌａ）和少精紫菜（Ｐ．Ｏｌｉｇｏｓｐｅｒｍａｔａｎｇｉａ）的１５个无性系丝状体进行了遗传多样分析，用１２０个Ｏｐｅｒｏｎ引物进行了筛选，从中选用来自ＯＰＪ－１８和ＯＰＮ—０２扩增出的８条多态性条带构建了这１５个紫菜无性系的ＤＮＡ指纹图谱，在该图谱中每个紫菜无性系均有各自特异的ＤＮＡ指纹．用１和０分别表示ＤＮＡ带的出现和缺失，将各个无性系的ＤＮＡ指纹用计算机语言表示，建立了１５个紫菜无性系的计算机化ＤＮＡ指纹；在此基础上设计了紫菜无性系种质鉴定的计算机软件ＰｈＧＩ．

摘要：目的探讨梅花鹿鞭及牛鞭线粒体细胞色素b(cytochrome b,Cytb)基因特异性片段特征,建立梅花鹿鞭的dna指纹鉴定方法。方法采用引物设计软件Primer Premier 5.0设计了用于鉴定梅花鹿鞭的特异性引物,用此引物对市售的梅花鹿鞭样本进行dna指纹鉴定。结果梅花鹿鞭能扩增出306 bp大小的片段,而牛鞭未能扩增出相应片段。结论梅花鹿鞭dna具有特异性指纹特征,所得梅花鹿鞭dna指纹特征图谱可用于市售梅花鹿鞭的鉴定。

摘要：目的:建立中药材紫河车遗传标志物dna指纹-免疫胶体金试纸条快速分子鉴定方法,研发一体化质量控制基因检测试剂盒。方法:自主研发紫河车模板dna提取的方法及试剂,根据人mtdna cytb基因设计种属特异性引物,引物的5'端分别用FAM、Biotin标记,筛选PCR最佳退火温度及循环次数,建立dna指纹分子鉴定方法,研发PCR基因检测试剂预混液,采用分子克隆及基因测序技术制备对照药材dna克隆液,利用免疫胶体金试纸条进行结果检测,开发出集“dna提取试剂、PCR基因检测试剂预混液、对照药材dna克隆液、空白对照液、试纸条”为一体的快速基因检测试剂盒,并进行特异性、重现性、灵敏性、稳定性的评价。结果:自主研发的dna提取试剂提取的模板dna质量浓度均在150~280 ng·μL^(-1),纯度均在1.8~1.9,琼脂糖凝胶电泳无拖尾。紫河车特异性引物在退火温度59℃、循环20次时;免疫胶体金试纸条显示:紫河车对照药材及正品出现2条红色条带,易混品及空白对照出现1条红的条带。琼脂糖凝胶电泳验证正确。对照药材dna测序结果与人mtdna cytb基因同源性100%。自主研发的一体化快速基因检测试剂盒的特异性强,重现性好,稳定性好,灵敏度为0.1 ng·μL^(-1)。结论:dna指纹-免疫胶体金试纸条分子鉴定方法能够特异、准确、快速、可视化地对紫河车的真伪进行鉴定,一体化快速基因检测试剂盒为紫河车质量控制提供规范化、标准化的检测方式,更适合现场实地检测,可普遍推广使用。

摘要：分子生物学的迅速发展推动了群体遗传学理论在植物病理学中的应用,由于建立了有效的dna遗传标记体系,大大推进了对一些重要病原真菌群体遗传特征的认识,如稻瘟菌(Magnaporthe grisea),马铃薯晚疫菌(Phytophthora infestans),大麦白粉菌(Erysiphe graminis ***),以及小麦颖枯菌(Septoria tritici)等。阐明病原菌的群体生物学特征是筛选和鉴定抗病资源、合理布局抗病基因以及设计有效的病害防治策略的基础。小麦条锈病是我国小麦最重要的病害之一,全国协作攻关已有四十多年的历史,通过对病菌群体的毒性分析,逐步形成了条锈病的有效的综合防治体系,为稳定小麦生产做出重大贡献。然而,由于传统的毒性分析方法本身缺乏遗传标记,限制了对这一活体营养病菌群体进化和毒性变异机制认识的深入,建立其dna分子标记体系,可望为深入认识条锈菌的群体生物学和流行学奠定基础。在前期工作中我们在条锈菌基因组中克隆到一个中度重复的dna序列家族PSR序列,这在锈菌类中尚属首次,本文报道用其中的PSR331序列的亚克隆PSR331S3对我国小麦条锈菌模式菌系进行dna指纹分析的研究结果。

摘要：目的:分析鹿茸线粒体细胞色素b(Cytb)和细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因特异性,建立双重PCR技术鉴别鹿茸真伪的分子指纹特征。方法:利用碱变性法提取梅花鹿茸、马鹿茸、驯鹿茸和新西兰鹿茸的基因组dna,应用引物设计软件Premier 5.0针对Cytb和COⅠ分别设计特异性引物(分别为Cytb 1、2和COⅠ1、2、3),采用单一及双重引物分别进行PCR扩增,筛选特异性强的引物,确定最佳PCR反应条件。结果:采用碱变性法提取的鹿茸基因组dna片段长度为23 000bp,dna纯度即A(260)/A(280)为1.80±0.02;应用单一引物进行PCR扩增无法鉴定鹿茸的真伪,而引物Cytb 1和COⅠ1组合后,解链温度为58℃时,梅花鹿茸(吉林、安徽)、马鹿茸均能扩增出395和525bp大小的2个片段,而驯鹿茸和新西兰鹿茸均未能扩增出相应片段;采用该提取方法及最优化的PCR反应条件,对市售样品进行检测,检测结果与实际情况完全一致。结论:双重PCR技术可从分子水平鉴别鹿茸的真伪,该方法特异性高、实用性强,且简便快捷,在鹿茸真伪鉴别方面具有较高的应用价值。

摘要：许多研究已在其结核分枝杆菌分离株共享dna指纹的基础上定义了患者簇。成簇相当于最近的传播,并且对伴随结核分枝杆菌正在高度传播人群亚组来说,与成簇有关的因素已作为指标被找出。在进行和解释这些研究中值得考虑的提醒应予以注意。例如,根据标志物的稳定性和长时间在人群中的菌株数量,某些并非近期传播的原因使菌株组可能完全相同。如果病例对特定人群是新移民或在研究中不是所有人群中的病例都被包括的话,确定由近期传播引发的病例可能不作为成簇被见到。所见的成簇数量将根据研究持续的时间。 在研究的设计、所包括病例的比例、补充和所使用成簇的界定上,研究应给出精确的资料。成簇的数据应至少被年龄、性别和移民状况分开。为了最大的获得信息,研究应涉及一个人群中所有病例的高比例、与传统的流行病学接触调查结合进行(如果可能的话)、并且提供人群中结核病发病资料和患者的年龄、性别、人类免疫缺损病毒状况、耐药性及社会和种族组资料。关键词:结核病;分子流行病学;dna指纹;RFLP;传播;

摘要：背景:结核病在一个低患病国家中的暴发流行。目的:描述一个国际传染源追踪过程,在此过程中限定性片段长度多态性分析(RFLP)起到了一个必不可少的作用。设计:1993年报告一名患结核性脑膜炎的儿童因传染源不能确定,在荷兰北部的港口城镇Harlin-gen开始了一项大规模的传染源追踪行动。传统的接触者追踪以检出感染源。RFLP用于绘制结核病传播图和鉴定传染源病例。结果:此项调查由荷兰北部扩展至其西部的几个地方。在筛查的6519人中;有276例受到感染者,其中确定了49例活动性结核。来自所有28例培养阳性患者的结核菌分离株的RFLP分析显示Harlingen型dna指纹。传染源追踪5个月后鉴定出传染源病例是在英国。直到1996年总共发现37例患者(荷兰28例、英国7例、苏里南1例、摩洛哥1例)具有Harlingen型dna特征的分离株。除非更明确的评估,方可以确定37例患者中5例与传染源病例或Harlingen的暴发流行无关。结论:证实RFLP分型在指导国际传染源追踪和接触者调查中是一个很有用的工具。

摘要：利用农业行业标准NY/T-1433-2007、NY/T-1433-2014中推荐的53对SSR引物,对宁波地区34个水稻品种进行dna指纹图谱构建和遗传多样性分析。53对引物在研究材料中共获得183个等位基因,每对引物得到的等位基因数为1~7个,平均每对引物可获得3.5个等位基因。遗传相似性和聚类分析结果表明,34份水稻品种在遗传相似系数为0.5处可分为籼粳两个类群,其中,甬优系列籼粳杂交组合、6个常规粳稻及3个糯稻归为粳稻类群,6个常规籼稻和5个杂交籼稻归为籼稻类群。用RM590和RM3331对19个甬优杂交稻系列品种进行100粒种子的纯度鉴定,仅甬优2640和甬优50检测到1个单株的混杂。结果为SSR标记在宁波水稻品种的纯度和真伪鉴定方面的应用提供了一定的技术支撑。

摘要：目的 通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)与核酸试纸条相结合的方法,实现鹿茸真伪的可视化检测。方法 采用十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulfate, SDS)碱变性法提取正品及伪品鹿茸样品基因组dna,通过查找细胞色素C氧化酶亚基I(COI)特异性位点,应用Primer 3.0软件设计鹿茸特异引物,摸索PCR最佳反应体系及条件,建立PCR-核酸试纸条及琼脂糖凝胶电泳鉴定鹿茸真伪的最优条件。同时,通过克隆测序,验证鹿茸真伪鉴定的准确性。结果 本实验中正品鹿茸在PCR-核酸试纸条上均出现两条带,阴性对照及伪品出现一条带,与琼脂糖凝胶电泳结果吻合,且试纸条检测的灵敏度可达1 ng·μL^(-1)。对9个市售鹿茸样品检测,正品鹿茸5个,合格率为45%。结论 自主构建的PCR-核酸试纸条检测方法简单、快速、特异性较好,可在较短时间内实现鹿茸真伪的可视化检测,检测结果稳定,为中药材鉴定提供又一新的方法。

摘要：目的:建立对牛鞭药材的聚合酶链式反应(PCR)鉴定方法,从分子水平上对牛鞭药材的真伪进行鉴定。方法:提取牛鞭及其伪品(驴鞭、猪鞭、羊鞭)的基因组dna,并对其完整性、纯度和浓度进行检测。利用GenBank相关信息,以牛鞭的线粒体细胞色素b基因(Cyt b)为靶基因,应用Primer-BLAST在线软件设计特异性引物,并对不同物种鞭类样品进行PCR扩增,对产物进行电泳分析;对获得的牛鞭样本PCR产物进行克隆和dna测序验证。对所建立的PCR鉴定方法进行特异性和重复性考察验证。结果:提取所得的牛鞭及其伪品dna的纯度较高,无蛋白质或RNA污染;1.5%琼脂糖凝胶电泳结果显示,牛鞭样本在200~300 bp之间均出现明显的目的基因条带,而其他伪品未见相应条带出现。dna测序结果证实,所获牛鞭样本基因片段的核苷酸序列与GeneBank中牛鞭物种相似性均为100%。方法学验证结果显示所建方法特异性、重复性均良好。结论:本研究所建基于Cyt b基因的PCR鉴定方法简单、快速,准确性、特异性、重复性均良好,可满足牛鞭及其伪品的分析鉴定需求。