摘要：采用生物素磁珠富集法,用生物素标记的(GT)15和(CT)15两种探针与细角螺基因组MseI酶切的300～1200bp片段杂交,杂交复合物与链霉亲和素磁珠结合,捕获含有重复序列的微卫星片段。最后将磁珠捕获到的重复序列与PMD19-T载体连接后克隆到DH5α中构建微卫星基因组文库。通过PCR检测出354个阳性克隆,从中随机选取248个片段大于500bp的阳性克隆进行测序,结果显示,在220个成功测序的阳性克隆中共获得278个微卫星序列,其中完美型171个,占61.5%;非完美型81个,占29.1%;复合型26个,占9.4%。除探针使用的GT和CT的重复序列外,还筛选到三碱基GTT、TGG、GAA、CAA;四碱基TCTA、ACAG、TAGA、GTGA、GTCT、GATA及五碱基TTTTG的重复序列。在278条序列中共有82条可以设计引物。

摘要：采用磁珠富集法,利用生物素标记的(CA)12寡核苷酸探针从黑斑原(鱼兆)基因组dna MboI酶切的400—1000 bp片段中筛选CA/GT微卫星位点,洗脱的杂交片段克隆到pMD18-T载体上构建富集微卫星基因组文库后,通过PCR筛选检测出720个阳性克隆,占所有克隆的89.2%,从阳性克隆中随机选取139个进行测序,序列分析发现,124个克隆含有7个以上的重复序列,其中完全的为80个(64.5%),不完全的为40个(32.3%),复合的为15个(3.2%),重复次数范围为7—165次,平均为52次。在124条序列中共59条可以设计引物。

摘要：利用双重杂交筛选法从已经构建的 A 型新生隐球菌 dna 克隆库(pCN)中筛选特异性探针。依据克隆库载体 pUC18的核苷酸序列设计并合成一对引物,PCR 扩增克隆库的插入片段,制备杂交膜。同位素标记26种鉴别菌及正常人的总 dna 与克隆库的 PCR 产物杂交,获得28个候选克隆。同位素标记候选克隆的插入片段(以低熔点胶回收)与上述27种鉴别 dna 杂交,获得特异性探针。结果:从已经构建的 pCN 中筛选出了3个特异性探针:pCNⅡA6、pCNⅡB5、pCNⅢG1,其中 pCNⅡA6只与A型新生隐球菌的 dna 杂交,而不与其它鉴别 dna 杂交,为 A 型特异性克隆;pCNⅡB5只与新生隐球菌的 dna 杂交,为种特异性克隆;pCNⅢG1只与 A、D 型新生隐球菌的 dna 杂交,为新生变种特异性克隆。应用上述特异性探针可以对隐球菌感染进行早期快速诊断及区分新生变种和格特变种。

摘要：湖南医科大学医学遗传学国家重点实验室邓汉湘、夏家辉等,于1989年10月在世界上首创了一个寡核苷酸介导的PCR技术。他们将这一技术成功用于染色体显微切割与显微克隆领域,在国际上率先建立了“染色体区带特异性绘画技术刀。该项技术的关键之处在于,巧妙设计了1个由24个核苷酸组成的结合体。