摘要：为克服不同发育阶段和不同形态特征的检疫性杂草少花蒺藜草的形态鉴定限制,通过设计少花蒺藜草dna条形码mat K、ITS、rbc L、psb A和trn L序列引物并对其PCR反应体系优化,比较各序列的扩增和测序效率。结果表明:mat K、ITS、rbc L、psb A和trn L序列引物对少花蒺藜草的扩增和测序成功率均较高,PCR反应的最佳退火温度分别为mat K 56℃、ITS 60℃、rbc L 60℃、psb A 60℃、trn L 60℃。在上述反应体系和条件下获得清晰明亮的目的条带,mat K、ITS、rbc L、psb A和trn L可作为鉴别检疫性杂草少花蒺藜草dna条形码组合的参考序列。

摘要：目的:基于dna条形码技术和高分辨率熔解曲线(HRM)技术鉴别紫草市场样品的真伪并建立紫草药材的RFLP-HRM鉴别方法。方法:通过聚合酶链式反应(PCR)对紫草药材的ITS2序列进行扩增;利用MEGA 6.06软件对紫草药材的ITS2序列进行NJ树聚类分析和遗传距离分析;对市场中紫草非药典品进行基原确证;针对紫草药材的ITS2序列利用Primer Premier 5软件进行引物设计;对经设计、合成的引物通过HRM实验进行筛选;建立紫草药材的RFLP-HRM鉴定方法。结果:通过对紫草药材的ITS2序列进行NJ树聚类分析和遗传距离分析,可以有效区分新疆紫草、疏花软紫草、黄花软紫草及市场上非药典来源的紫草药材(紫草非药典品);经过Primer Premier 5软件进行引物设计共选出4对引物进行合成;通过HRM实验筛选出引物Zcf-1为最佳实验引物;确立了有效鉴别紫草市场药材的RFLP-HRM方法。结论:通过dna条形码和HRM技术均能有效鉴别紫草市场药材真伪,且结果一致,起到互相验证的作用,建立了紫草市场药材的RFLP-HRM鉴定方法,为紫草及其他中药民族药品种的快速鉴定技术提供了可以参考的依据。

摘要：以翅荚木标本为研究材料,利用显微技术对其宏观构造及微观构造进行观察和分析;并以翅荚木9年生新鲜材作为对照组,对两者的dna序列进行比对分析,分别对2个木材样品的trnL、rbcL和psbA-trnH 3段dna序列进行PCR扩增,并对PCR产物进行测序和序列比对。结果表明:翅荚木为散孔材,生长轮明显;单管孔或少数径列复管孔(2~4个),穿孔板为单穿孔,具多角形互列管间纹孔式,导管-射线间纹孔式同管间纹孔式;射线组织主为异Ⅲ型,稀异Ⅱ型。CTAB试剂盒法,能够成功提取满足PCR扩增需求的翅荚木新鲜组织及标本的dna。2个木材样品的3段dna序列均能与NCBI系统中翅荚木100%匹配,其中psbA-trnH序列能与其他树种区分开,有较高的分辨率,可作为翅荚木分子鉴定的备选条形码,从3段序列构建的系统发育树来看,几个树种可以被正确聚类。

摘要：随着乳饮料行业快速发展,掺杂使假现象层出不穷,对核桃乳真实成分的准确鉴定变的尤为重要。核桃乳属深加工食品,dna破坏严重,dna提取是开展核桃乳dna条形码鉴定的首要环节。为优化核桃乳dna提取方法,并基于psbA-trnH基因dna条形码建立核桃乳的掺假造假鉴定方法。以10种不同品牌的核桃乳为样品,采用3种方法(静置抽提、异丙醇沉淀、抽真空冻干)进行预处理,再用2种CTAB裂解沉淀方法和3种试剂盒方法(康为新型植物基因组dna提取试剂盒、爱思进植物基因组dna提取试剂盒和天根深加工食品dna提取试剂盒)提取核桃乳dna,并在此基础上创新尝试了CTAB与爱思进试剂盒结合方法。以提取的市售核桃乳dna为模板,利用自行设计的特异性基因psbA-trnH-wal鉴定样品中是否含有核桃成分,确定造假情况;选择常见植物候选基因psbA-trnH鉴定样品中是否含有其他成分,确定掺假情况。结果表明,抽真空冻干预处理方法优于其他2种预处理方式。CTAB与爱思进试剂盒结合方法能提取到纯度好、得率高、扩增能力强的核桃乳dna,是最佳的核桃乳dna提取方法。扩增及比对结果显示,1款核桃乳样品中含有花生,属于掺假产品。抽真空冻干预处理、CTAB与爱思进试剂盒结合为优化后的核桃乳dna提取方法,psbA-trnH-wal基因和psbA-trnH基因结合能够对核桃乳及其掺假造假品进行快速准确的鉴定。

摘要：收集盔孢伞属Galerina 16个物种40份标本,提取样品基因组dna,使用通用引物扩增内转录间隔区(ITS)、基因内间隔区(IGS)、核糖体大亚基(nrLSU)、线粒体小亚基(mtSSU)、翻译延长因子(EF1-α)、RNA聚合酶第一大亚基(RPB1)、RNA聚合酶第二大亚基(RPB2)和β-微管蛋白(β-tubulin)8个基因序列进行双向测序,将得到的序列进行拼接校对后计算物种的种内、种间遗传距离并构建发育树。结果表明:ITS序列最适合作为盔孢伞属的dna条形码,基于ITS序列开发出盔孢伞属的dna微条形码、设计出微条形码引物。该引物具有良好的通用性和较强的适用性,对材料品质要求低,能够扩增由于蒸煮或消化等原因导致dna发生降解的材料,具有一定的实际应用意义。

摘要：昆明杯冠藤和青羊参隶属于夹竹桃科鹅绒藤属,是重要的药用植物。本研究对昆明杯冠藤和青羊参叶绿体基因组进行测序、组装,并对两者叶绿体基因组的结构特征及其系统发育位置进行了分析。结果表明,昆明杯冠藤和青羊参叶绿体基因组均具有典型的四分体结构,注释到133个基因,两者总GC含量接近。密码子偏好性分析显示,昆明杯冠藤和青羊参叶绿体基因组中相对同义密码子使用度略有不同,但差异不大,且在密码子第3位有强烈的A或U偏好。在两者叶绿体基因组中分别检测到91个和103个简单重复序列,以A/T类型重复占比最大。核苷酸多态性分析显示,鹅绒藤属叶绿体基因组共有间区序列的核苷酸多态性值高于共有基因序列,基于共有间区序列的高变区设计了一对引物可对昆明杯冠藤和青羊参进行鉴别。系统发育分析表明,昆明杯冠藤和地梢瓜亲缘关系最近,青羊参、白首乌和隔山消在鹅绒藤属中形成稳定的单系分支,三者亲缘关系较近。对昆明杯冠藤和青羊参叶绿体基因组特征及其系统发育的比较分析将为两种植物的物种鉴定及鹅绒藤属植物的遗传多样性和系统进化研究奠定理论基础。

摘要：目的:基于巢式聚合酶链式反应(PCR)理念设计并筛选出可用于高效扩增与鉴别紫草市场样品真伪的特异性引物。方法:针对新疆紫草的ITS序列和紫草非《中华人民共和国药典》品ITS2序列,利用Primer Premier 5软件进行巢式引物设计;比较ITS2通用引物PCR和巢式PCR对紫草药材基因组dna的扩增效率;基于巢式引物直接扩增紫草基因组dna,并进行琼脂糖凝胶电泳检测;基于扩增产物片段长度、变异位点覆盖情况对设计的紫草药材特异性引物进行评价。结果:经过Primer Premier 5软件进行引物设计共选出11对引物进行合成;巢式PCR对紫草药材基因组dna的扩增效率明显优于ITS2通用引物PCR;基于巢式引物直接扩增紫草基因组dna琼脂糖凝胶电泳检测的结果明显优于ITS2引物直接扩增紫草基因组dna,且呈单一条带;确定AE-9S/AE-2A、AE-4S/AE-10A、AE-12S/10A、AE-29S/AE-29A共4对引物适用于紫草正伪品鉴定。结论:在dna条形码鉴定和巢式PCR技术的基础上,确定了4对可以用于有效区分药材市场中主流的新疆紫草和紫草非《中华人民共和国药典》品的特异性引物,为后续紫草药材及其他中药民族药品种的鉴定方法研究与开发提供了可参考的依据。

摘要：dna条形码技术属于新兴的中药基原鉴定技术,是传统中药鉴定方法的补充,能够从分子水平对物种进行准确鉴定。2015版《中国药典》收载该方法,2020版扩大其应用范围,该技术将是中药材基原鉴定主流方法之一。设计了“dna条形码鉴定白芍和白术”实验,根据遗传距离、NJ树、二级结构对白芍和白术进行鉴定。使学生从抽象的原理知识转化为具体的数字图形,加深理解其原理、操作方法及技术,为提升学生科研能力或胜任中药分子鉴定岗位提供一定的基础。

摘要：为了对常见的4种肉类及相关肉制品进行掺假鉴定,判别与产品标签是否相符,本研究以COI基因为靶基因,建立了4种动物源性食品dna条形码鉴别技术。分别提取牛、羊、猪、鸭四大物种的基因组dna为模板,以其COI基因的保守序列区设计6对通用引物,结合文献报道及数据库提供的7对通用引物进行PCR扩增,并将测序结果提交Gen Bank数据库Blast比对,评价不同dna条形码的检测鉴别能力。筛选出COI-A为最优序列,在4个物种中扩增效率100%。对抽检的20个批次的肉加工品样品进行检测,鉴定结果约有90%的样品与产品标签标示的成分相符。其中1个批次的牛丸制品因肉类成分含量低未扩增成功,1个批次的牛丸制品检出鸭源成分,判定掺假。dna条形码技术快速有效,本研究筛选的COI-A序列可直接用于牛、羊、猪、鸭及其肉制品的鉴定,并为其它常见动物源性食品的种类鉴定提供一定参考依据。

摘要：目的利用dna条形码信息研制dna芯片,建立快速高效的医学媒介蚊类鉴定方法。方法以蚊科5属15种,共30个样本为研究材料,获取其dna条形码信息(COⅠ基因片段序列),采用基因块motif技术,搜索15个样本的同源保守基因序列,制作虚拟dna条形码芯片。虚拟电子杂交30个样本,应用软件Bio-Edit计算属、种及种内个体间的同一性,应用phylip3.66软件以最大简约法分别对杂交结果和原序列进行聚类分析比较。结果选择78个dna片段制作一张虚拟dna条形码芯片,计算属间的平均同一性为0.75,同一属内种间的平均同一性为0.84,种内个体间的平均同一性为0.98,聚类分析结果一致。结论研制的虚拟dna芯片能够鉴定本研究中的15种蚊虫,利用dna条形码信息,设计dna芯片在理论上可行。