摘要：基于国际生命条码联盟(CBOL,the Consortium for the Barcode of Life)提出的barcoding技术所确定的序列区域,针对猪的线粒体COⅠ基因序列设计特异性引物。为了避免食品中PCR抑制剂的影响,本实验设置GCG(胰岛素受体)基因125bp的纯化片段为内参照,控制假阴性结果的出现。通过优化PCR反应条件,猪和GCG基因的特异性产物在79.2℃和75℃有特异性熔解峰。设置牛、羊、鸡、兔、鼠和空白对照,均无扩增。测序结果表明,该猪特异性引物的PCR产物含有245bp的核苷酸序列与GenBank中相应序列吻合;该方法检出限为0.001%。

摘要：【目的】刺桐姬小蜂Quadrastichus erythrinae Kim体型小,传统的形态学鉴定方法难以快速准确识别。【方法】本研究测定了刺桐姬小蜂的rdna ITS1和ITS2序列,根据18S rdna部分序列,利用MEGA的最大相似法(Maximum Likehood)构建系统发育树。根据刺桐姬小蜂ITS1和ITS2序列设计了特异引物,应用特异引物对单只刺桐姬小蜂进行PCR扩增,可稳定地扩增出明显的目的dna条带。【结果】研究表明,基于ITS基因的dna条形码技术可以用于刺桐姬小蜂的快速准确鉴定。【结论】因此,采用ITS1和ITS2区的特异性引物可对刺桐姬小蜂进行快速分子鉴定。

摘要：目的该研究基于ITS序列对天葵及其混伪品进行准确鉴别。方法通过PCR扩增ITS序列,联合Genebank下载的天葵混伪品及近缘种序列、构建系统发育树(Neghbor-Joining,NJ);并基于ITS序列上的变异位点设计特异性PCR引物和HRM引物、对天葵及其混伪品进行鉴别。结果在构建的NJ树中、天葵及其混伪品和近缘种各自形成单系分支。且都获得较高的支持;在特异性PCR鉴别中,天葵有条带扩增成功,而混伪品则没有扩出条带;而利用HRM技术鉴别,结果显示,天葵及其混伪品和Tm值均有明显差异。结论 ITS序列能够作为天葵及其混伪品和近缘种的dna鉴别条形码、此外,基于ITS序列所设计的特异性PCR引物和HRM引物,都能够对天葵及其混伪品进行准确的鉴别。

摘要：美国白蛾是一种危害性极大的世界性检疫害虫。为研发美国白蛾的准确、快速的分子鉴定技术,克服单纯依赖形态学方法为主的局限性,本研究以美国白蛾及其形态近似的8种蛾类的线粒体COⅠ基因为模板,筛选得到美国白蛾的特异性dna序列,并以此设计出针对美国白蛾快速鉴定的MGB探针,应用荧光PCR方法对美国白蛾进行特异性的扩增,并进行dna条形码比较分析。结果显示,美国白蛾及其近似种的dna条码都为各物种所独有,不存在物种之间的共享。该结果表明该条码在美国白蛾及其近似种中有很好的识别能力,可以用于美国白蛾的物种鉴定。本项目的研究结果为美国白蛾的口岸检疫鉴定、森防部门的监测和除治提供了新型技术手段。

摘要：长江上中游地区是世界李的原产地,李品种资源丰富,传统主栽品种为江安大白李。为了快速甄别重庆地方李与江安大白李之间的亲缘关系,加快重庆地方良种李新品种培育,采用dna条形码技术,运用分子鉴定方法,从分子水平对重庆开州区选择的开州晚熟李与江安大白李进行matK、rbcL、ITS序列测定和比对,构建物种NJ进化树,快速鉴定两者之间的亲缘关系,指导地方李新品种培育。通过对开州晚熟李和江安大白李叶片样品的matK、rbcL、ITS序列测定,发现两种地方李的3种序列中,ITS、rbcL序列NJ进化树均表现为梳子状,差异不明显,两者之间达不到区分"种"的程度;matK序列NJ进化树之间有明显的差异。研究表明,开州晚熟李与江安大白李亲缘关系较近,属同种植物,但两者存在品种间遗传差异,通过进一步的培育有望育成新品种。

摘要：【目的】明确广西右江流域野生罗非鱼的种群类别及其杂合情况,为广西右江流域罗非鱼的入侵防控及本土珍稀物种保护提供科学依据。【方法】从广西右江流域隆安、平果、田东、田阳和百色5个采样点采集野生罗非鱼样本共136尾,提取各采样点罗非鱼样本dna,设计特异性引物对线粒体COⅠ基因及核基因(enc1、ptr和sh3px3)进行群体扩增,通过dnaSTAR 7.1的Megalign程序对所有样本的COⅠ基因序列进行同源性比对分析,以确定罗非鱼样本的母本;采用MEGA 6.0对enc1、ptr和sh3px3基因进行序列比对和校正,并构建各采样点罗非鱼样本的系统发育进化树。【结果】广西右江流域5个采样点的罗非鱼母本种类共有4种,分别为尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)、齐氏罗非鱼(Coptodon zillii)、莫桑比克罗非鱼(O. mossambicus)和奥利亚罗非鱼(O. aureus)。在26尾隆安罗非鱼样本中无杂合个体;在36尾平果罗非鱼样本中有3个杂合个体,杂合率为8.3%;在20尾田东罗非鱼样本中有2个杂合个体,杂合率为10.0%;在30尾田阳罗非鱼样本中有2个杂合个体,杂合率为6.7%;在24尾百色罗非鱼样本中有4个杂合个体,杂合率为16.7%。【结论】广西右江流域野生罗非鱼的种间杂交率并不高,但其杂交优势更有利于罗非鱼种群的扩散,进一步侵占土著鱼种的生存空间,严重威胁广西右江流域鱼类资源的多样性,有关部门应加强监管力度以防止野生罗非鱼种群迅速扩散。

摘要：目的:基于trnL-F序列并联合HRM技术对天南星类药材及其常见混伪品进行快速有效鉴别。方法:通过PCR扩增测序,应用MEGA 6.0软件对序列特征及遗传距离进行分析,构建系统发育树;在特异性位点两端设计引物进行HRM鉴别。结果:序列长度在438~499 bp范围内,GC含量在33.11%~35.59%之间。基于K2P参数模型分析,样品间最大种内平均遗传距离为0.008,而样品间的最小种间平均遗传距离为0.010。在构建的最大简约树和贝叶斯树中,天南星类药材各自聚为单系,且都获得了高度的支持。联合HRM扩增结果分析发现,天南星类群(天南星、异叶天南星、东北天南星)Tm值为77.55±0.16,而虎掌类群Tm值为77.95±0.07,从熔解曲线的峰图上能够明显区分。结论:叶绿体trnL-F序列能够作为天南星类药材的鉴别条形码,并联合HRM技术对天南星类药材进行快速有效鉴别。

摘要：根据近源物种线粒体序列的同源比对,在COI基因上下游保守区域设计一对通用引物COF/COR。以卵形鲳鲹肌肉总dna为模板,PCR扩增获得特异的dna片段,经克隆、测序和比对证实该片段包含了卵形鲳鲹线粒体COI基因完整编码区1551bp。对5个个体分别测序后比对,发现卵形鲳鲹COI基因dna序列在钦州湾种群个体间至少存在7个变异位点,使5个个体分别具有5种不同的单倍型。将卵形鲳鲹种内不同个体及鲹科其他物种的CO I核酸序列进行比较分析,根据比对结果构建鲳鲹科各物种的系统进化树,支持鲹科下设四个亚科(鲹亚科,鰤亚科,鲳鲹亚科,鰆鲹亚科)的分类系统。通过COI基因遗传距离计算发现,卵形鲳鲹种内不同地理种群个体间遗传距离为0.001～0.005,显著低于Hebert等所推荐的物种鉴定最小种间遗传距离2%,而鲹科不同物种间遗传距离大于0.044,与形态学分类一致,说明COI作为卵形鲳鲹dna条形码应用是可行的。

摘要：目的:通过dna条形码鉴定和建立特异性引物扩增的方法,有效区分菲牛蛭与其他水蛭品种。方法:通过聚合酶链式反应(PCR)对水蛭样品的COI序列进行扩增,利用MEGA 6.06软件通过建树法进行NJ树聚类分析,针对菲牛蛭素的编码基因序列、利用Primer Premier 5软件进行引物设计,对经设计、合成的8对引物通过PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳实验进行筛选,并确定特异性引物的最佳退火温度。结果:通过COI序列的NJ树聚类分析可以确定20批水蛭样品中的9批菲牛蛭样品,经过Primer Premier 5软件进行引物设计共选出8对引物进行合成,通过PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳预实验筛选出引物7、为最佳实验引物,且确定了引物7的最佳退火温度为49℃。结论:通过COI序列的dna条形码研究,确定了样品中的菲牛蛭,通过特异性引物PCR扩增和电泳检测,有效地将菲牛蛭与其他水蛭样品进行区分,为菲牛蛭的分子生物学鉴定方法提供了参考。

摘要：伊犁河谷生物多样性的调查、研究和保护是伊犁河谷实施可持续发展的一项重要内容。本文对结合了传统植物分类学及dna条形码技术产生的数据进行数字化处理,制作数字化植物标本,并对Web平台的展示方式进行一定的研究和讨论,使用合适的数据库管理系统和相关多媒体信息处理技术及动态网页制作技术,按照已有的规范和标准,完成"伊犁河谷植物区系物种资源数据库系统"的设计与实现,对整理和保存伊犁河谷植物多样性资源成果并进一步辅助河谷植物多样性保护与管理具有重要的现实意义和实用价值。