摘要：目的研发鹿胎dna阳性质控品,组装检测试剂盒。方法提取鹿胎及其伪品dna,设计通用鹿引物并进行PCR扩增,克隆种属特异性目的片段,构建鹿胎dna阳性质控品并组装dna检测试剂盒,进行试剂盒性能实验并应用于市售鹿胎样品检测。结果应用美国国家生物技术信息中心(NCBI)分析测序比对结果,正确率为100%,在526 bp处可见明显条带,与目的片段相符,可作为鹿胎阳性质控品。阳性质控品灵敏性最低检测限为10 ng·μL-1,经多次反复冻融的试剂盒,仍可确保PCR检测结果的稳定性。试剂盒应用于对市售鹿胎及伪品的检测,PCR检测结果与预期相符。结论构建鹿胎阳性质控品作为电泳分析时的阳性对照,结果更加准确稳定,适用于对鹿胎及伪品的快速鉴定,保障对鹿胎质量的有效监管。

摘要：目的:建立兔睾丸dna指纹鉴定方法,研发出兔睾丸dna检测试剂盒。方法:以穴兔线粒体dna(mt dna)细胞色素b(cyt b)基因作为靶基因,设计兔睾丸特异性引物,利用现代dna指纹技术,研制兔睾丸dna提取及检测试剂,并对试剂的特异性、重复性及稳定性进行考察;应用分子克隆及测序技术,克隆兔睾丸dna检测的标准品;进而建立兔睾丸dna指纹鉴定方法,制定质量标准,开发出兔睾丸dna检测试剂盒。结果:自主研发的试剂提取的兔睾丸dna结构完整性较好,dna浓度与纯度均较高;59℃时引物的特异性最强;兔睾丸正品均在326 bp处出现1条特异性扩增条带,而阴性及空白对照均未出现扩增条带;克隆测序后的兔睾丸dna序列与穴兔mt dna特异指纹区段同源性100%。结论:本研究建立的兔睾丸dna指纹鉴定方法特异、准确、可靠,研发的dna检测试剂盒操作简便,结果稳定,适于普及推广使用。

摘要：目的建立鹿鞭及其伪品指纹鉴定方法,开发鹿鞭dna检测试剂盒。方法采用改良的SDS方法从鹿鞭及牛鞭基因组中提取dna。以鹿鞭线粒体细胞色素b作为靶基因,设计鹿鞭特异性引物,利用现代dna指纹技术,研制了鹿鞭dna提取和检测试剂,建立鹿鞭指纹鉴定方法,开发出鹿鞭dna检测试剂盒。结果利用PCR指纹技术提取的鹿鞭基因组dna为21000 bp,纯度为1.80±0.10之间;应用特异性引物可准确鉴别鹿鞭及牛鞭样品,鹿鞭特异性扩增产物dna分子片段为307 bp,而牛鞭及阴性对照无扩增条带;自主研发鹿鞭dna检测试剂盒经反复冻融依然有效,多次进行特异性、稳定性和重现性试验,结果完全一致。结论鹿鞭dna检测试剂盒可作为鹿鞭鉴定的有效方法,该方法客观、准确、方便,可有效区分鹿鞭及其伪品。

摘要：目的建立中药材鹿心dna指纹鉴定方法,研发鹿心dna检测试剂盒。方法以梅花鹿和马鹿mtdna Cytb基因作为靶基因,设计小片段特异性引物,研制鹿心dna提取及PCR检测试剂;应用分子克隆及测序技术,克隆鹿心对照药材;并对试剂的特异性、重现性、稳定性及灵敏度进行考察;对市售鹿心样品进行真伪鉴定。结果自主研发的试剂提取鹿心的dna浓度纯度均达到PCR的要求;在退火温度为63℃时引物的特异性最强;克隆测序后的鹿心dna序列与鹿心mtdna Cytb特异指纹区段序列一致;自主研发的试剂重现性、稳定性良好,灵敏度达到0.5%;对市售30个鹿心样品进行检测,伪品率为40%。结论建立的鹿心dna指纹鉴定方法特异、准确、可靠,研制的鹿心dna检测试剂盒操作简便、结果稳定。