摘要：目的:构建dna甲基转移酶3a(dna methyltransferases 3a,DNMT3a)siRNA重组质粒稳定表达载体,为进一步探讨DNMT3a在多种生物学过程及肿瘤发生发展中的机制提供工具。方法:依据DNMT3a基因的cdna序列,利用siDESIGN软件获得RNAi靶位点后设计出对应的siRNA寡核苷酸模板,体外合成寡核苷酸片段经退火形成短双链,克隆到真核表达载体pSUPER-EGFP1中,构建DNMT3a siRNA重组质粒载体,经酶切鉴定后转染人肝癌细胞系SMMC-7721,荧光实时定量PCR初步分析DNMT3a经RNA干涉后的沉默效应。结果:成功构建了靶向DNMT3a基因的siRNA重组稳定表达载体,此载体有效地降低了肝癌细胞系中DNMT3a基因的表达水平。结论:通过该方法初步确定了沉默DNMT3a基因的较佳靶点。

摘要：目的:检测dna甲基转移酶3a(dna methyltransferase 3a,DNMT3a)突变的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者原代细胞中编码哺乳动物西罗莫司靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)基因的甲基化变化及基因表达情况,并研究西罗莫司靶向治疗该类AML肿瘤细胞的效果。方法:收集有DNMT3a突变及无DNMT3a突变的AML患者原代骨髓细胞,通过重硫酸盐测序(bisulfite genomic sequence,BSP)法、实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-q PCR)法分别检测m TOR的甲基化变化和基因表达变化,借助细胞增殖检测试剂盒(cell counting Kit-8,CCK-8)及凋亡试剂盒异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)检测用西罗莫司处理前后有DNMT3a突变及无DNMT3a突变的肿瘤细胞的增殖及凋亡情况。结果:DNMT3a突变的AML患者原代细胞中m TOR的甲基化降低且基因表达上调(P<0.05),西罗莫司可有效抑制DNMT3a突变的原代肿瘤细胞的增殖并引起其凋亡(P<0.05)。结论:与无DNMT3a突变的AML原代肿瘤细胞相比,西罗莫司可靶向mTOR抑制DNMT3a突变相关的AML原代肿瘤细胞的增殖,促使其凋亡,为进一步的临床用药提供了证据。

摘要：dna甲基转移酶3a(DNMT3a)是表观遗传修饰相关的重要基因之一,承担着dna从头甲基化的修饰工作。DNMT3a基因突变可见于多种血液系统肿瘤,尤其在急性髓系白血病(AML)中发生频率较高,并提示预后不良。近年来的研究显示,DNMT3a等表观遗传相关基因异常在血液肿瘤的发生发展中起重要作用,是AML发病的第Ⅲ类致病基因。该文就DNMT3a基因突变在血液肿瘤中的临床及相关基础研究进展作一综述。