摘要：目的研究登革病毒(dengue virus,DENV)的多价dna疫苗pVAX1-EDIII在小鼠体内的免疫原性及其保护作用。方法采用真核表达载体p VAX1,设计并构建含4种血清型登革病毒EDIII结构域的dna疫苗。在第0、14和42天采用电脉冲肌肉导入方式免疫小鼠。末次免疫后1周,ELISA检测针对4种血清型登革病毒的血清特异性IgG抗体水平;ELISpot检测免疫后小鼠脾细胞分泌特异性IL-4、IFN-γ的水平;体内中和实验检测小鼠免疫后血清对感染DENV和寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)乳鼠的保护效力。结果与对照组相比,电脉冲肌肉导入dna疫苗诱导产生较高滴度的IgG抗体与较强的细胞免疫应答。免疫后血清对致死剂量DENV感染的3日龄乳鼠有完全保护作用,对ZIKV感染C57BL/c 1日龄乳鼠有部分保护作用。结论电脉冲肌肉导入登革dna多价疫苗免疫可诱导针对4种血清型登革病毒的特异性体液免疫以及细胞免疫应答并能有效抵抗DENV的致死剂量攻毒,对ZIKV也能产生一定的保护效应,具有广谱抗黄病毒感染的潜力。

摘要：目的探究气管灌注和电脉冲肌肉导入2种免疫方式对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)dna疫苗免疫应答的影响。方法利用真核表达载体pVAX-1,设计并构建p RBD、p S-2P和p S-2P.3513种SARS-CoV-2 dna疫苗。在第0、2和4周采用气管灌注以及电脉冲肌肉导入2种方式免疫小鼠。末次免疫后2周,ELISA检测血清及阴道灌洗液特异性IgG抗体水平,肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)、鼻腔灌洗液(nasal solution,NS)以及阴道灌洗液(vaginal wash)特异性sIgA抗体水平;ELISpot检测免疫后小鼠脾细胞分泌特异性IFN-gamma的水平。结果气管灌注及电脉冲肌肉导入2种方式免疫SARS-CoV-2dna疫苗,仅气管灌注免疫可诱导特异性呼吸道黏膜sIgA应答,而电脉冲肌肉导入诱导了更强的细胞免疫应答。与气管灌注pRBD相比,气管灌注pS-2P和p S-2P.351可诱导更强的黏膜免疫应答和细胞免疫应答。结论气管灌注和电脉冲肌肉导入2种免疫方式均可诱导特异性体液免疫以及细胞免疫应答,电脉冲肌肉导入诱导了更强的细胞免疫应答,而气管灌注在诱导呼吸道黏膜免疫应答方面更具优势。

摘要：目的　设计新型HIV复合多表位dna疫苗 ,探讨其在小鼠体内的免疫应答。方法以HIV抗原表位为基础进行新型HIV多表位dna疫苗的抗原分子设计 ,利用化学合成的方法合成全新HIV抗原基因 ,并构建核酸疫苗重组质粒 ,免疫BALB c小鼠 ,利用合成的表位肽进行抗体水平、特异性淋巴细胞增殖实验、特异性CTL检测分析及迟发性超敏反应。同时 ,还对所设计的HIV复合多表位dna疫苗与编码HIV全结构蛋白的dna疫苗 (pVAXI gag gp12 0 )进行特异性CTL反应的比较研究。结果　所设计的新型HIV多表位dna疫苗可在BALB c小鼠体内诱导出针对所选表位的强表位特异性的CTL反应和抗体反应。而HIV复合多表位dna疫苗与编码HIV全结构蛋白的dna疫苗相比可诱导产生更强、更广泛的表位特异性的CTL应答。结论　所设计的HIV复合多表位dna疫苗对BALB

摘要：血凝素 (HA)是决定禽流感病毒的毒力强弱和免疫原性的主要蛋白质 .根据已发表的H9亚型AIV的HA基因序列 ,设计合成了 1对H9HA特异引物 ,以AIVA/Chicken/Henan/ 1 / 1 999/ (H9N2 )核酸为模板 ,通过RT PCR扩增出 1条 1 6kbcdna片段 .将HA基因插入pVAX1中 ,构建了真核表达质粒pVAX H9.采用活体电击法免疫 3周龄SPF鸡 1 0只 ,剂量为 5 0 μg/只 ,3周后加强免疫一次 ,5周后以 1 0 0倍鸡胚感染剂量 (EID)的HA基因同源病毒对所有鸡进行攻毒 .其间每周检测抗体水平变化 ,6周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离 .结果为攻毒后免疫组鸡HI效价为 9log2～ 1 0log2 ,对照组为 2log2～ 4log2 ;免疫组病毒分离数为 0 / 1 0 ,对照组为 1 0 / 1 0 .

摘要：新型冠状病毒肺炎引发的疫情对全球公众健康构成了严重威胁,全球新型冠状病毒疫苗研发正在从多条技术路线向前积极推进。核酸疫苗继传统减毒疫苗、灭活疫苗和基因工程亚单位疫苗之后被行业内称为"第三代疫苗技术",包括dna疫苗和m RNA疫苗,各有优势。本文回顾了dna疫苗的发展简史,经过十几年的改进,dna疫苗递送效率大幅度提升,尤其在应对严重急性呼吸综合征(SARS)、高致病性流感、中东呼吸综合征(MERS)、寨卡热(ZIKA)、裂谷热等突发性传染病方面,dna疫苗在临床中的初步效果得到了验证。本综述旨在讨论对抗传染病大流行的dna疫苗的研制,尤其是对新型冠状病毒dna疫苗的设计、优化、安全性和有效性等方面的考虑,并提出dna疫苗技术需要提升的方向。

摘要：本文设计合成了氟化超支化聚酰胺-胺并研究其作为流感dna疫苗递送载体的能力。首先采用迈克尔加成反应合成超支化聚酰胺-胺聚合物[hyperbranched poly(amido amine)s,HP],并进行氟化修饰(fluorinated HP,F-HP)通过设计特异性引物扩增目的基因,构建流感病毒PR8的核蛋白(nucleoprotein,NP)基因真核表达质粒,作为dna疫苗,F-HP与NP质粒通过静电作用形成纳米复合物(F-HP/NP)。结果表明:所合成的HP的分子质量为59.7 kDa多分散系数(polydispersity index,PDI)为2.67,F-HP中氟元素的含量为20%(质量比,w/w),聚合物能与NP质粒络合形成球形的纳米粒。聚合物与dna质量比为5~10时,纳米复合物的粒径分布在100 nm左右,并随质量比的升高而减小。氟化修饰有利于提高纳米复合物的细胞摄取及溶酶体逃逸能力,进一步提高NP的细胞内表达水平。体内免疫实验表明,与HP/NP纳米复合物相比,氟化修饰的F-HP/NP纳米复合物对CD8^+T细胞具有更强的免疫应答诱导效应。以上结果说明氟化修饰的超支化聚酰胺-胺作为dna疫苗载体具有可行性。动物实验经扬州大学大学实验动物伦理委员会批准。

摘要：为研制新型有效的HBV治疗性疫苗,构建了含PreS1与S融合基因的HBV dna疫苗,即pVRC-HBSS1(PreS121–47 aa融合在S抗原1–223 aa的羧基端),并制备了CHO表达相同结构的蛋白颗粒亚单位疫苗HBSS1。在Balb/C小鼠中采用不同的dna免疫方式(即肌肉注射、皮内注射加电转)初免3次,蛋白颗粒亚单位疫苗(不同佐剂)肌肉注射加强免疫1次,然后我们分析比较了各组疫苗所引起的免疫应答特点。抗体检测结果表明:皮内注射结合电转初免组产生的PreS1与S特异性抗体水平皆高于肌肉直接注射组。进一步还发现dna疫苗与蛋白颗粒亚单位疫苗两种疫苗联合应用后S抗原特异的细胞免疫应答(IFN-γELISpot分析)明显高于dna疫苗或蛋白颗粒亚单位单独应用,其中皮内注射+电转结合蛋白颗粒亚单位疫苗联合免疫组可产生最强的细胞免疫应答。这些研究为新型HBV治疗性疫苗的优化设计与合理应用提供了依据。

摘要：本研究中的复合型疫苗是采用双疫苗组分.dna疫苗和重组痘病毒载体疫苗(简称“痘苗”),免疫策略为“ptime-boost”方案。本研究设计了dna单独免疫、复合型疫苗以及痘苗单独免疫1次和2次的毒性研究。并且根据其体液免疫和细胞免疫的特点,检测其免疫原性、免疫毒性相关指标,进行了dna疫苗和痘苗的dna分布研究。建立了对dna疫苗以及重组病毒载体疫苗进行安全性研究的试验体系。[第一段]

摘要：研究旨在构建铜绿假单胞菌oprH基因的dna疫苗。试验根据GenBank中已发表的铜绿假单胞菌的oprH基因序列,设计合成了一对特异性引物,利用PCR技术由铜绿假单胞菌基因组dna中扩增获得该目的基因,进行胶回收纯化并与T载体进行连接,经双酶切和PCR鉴定后将重组质粒进行酶切回收目的基因片段,并将其亚克隆于真核表达载体pCAGGS-HA中,以双酶切和PCR方法进行鉴定。结果显示:PCR成功扩增出约600 bp的oprH基因,连接T载体后的重组质粒经双酶切和PCR鉴定,均可获得大小正确的目的基因片段。真核重组载体鉴定结果显示,oprH基因成功克隆于真核表达载体pCAGGS-HA中。研究表明,试验成功构建了oprH基因的dna疫苗,为进一步研究其免疫效果及铜绿假单胞菌新型疫苗的研制提供参考。

摘要：目的　设计新型抗肿瘤治疗性疫苗。方法　以多聚赖氨酸为桥梁 ,将抗原肽与其编码基因并置于同一疫苗颗粒 ,进而设计出颗粒性肽 dna复合疫苗。结果　该疫苗可激发体内肿瘤特异性CTL反应 ,并对P815肿瘤具有特异性杀伤活性。结论　该颗粒性肽