摘要：血凝素 (HA)是决定禽流感病毒的毒力强弱和免疫原性的主要蛋白质 .根据已发表的H9亚型AIV的HA基因序列 ,设计合成了 1对H9HA特异引物 ,以AIVA/Chicken/Henan/ 1 / 1 999/ (H9N2 )核酸为模板 ,通过RT PCR扩增出 1条 1 6kbcdna片段 .将HA基因插入pVAX1中 ,构建了真核表达质粒pVAX H9.采用活体电击法免疫 3周龄SPF鸡 1 0只 ,剂量为 5 0 μg/只 ,3周后加强免疫一次 ,5周后以 1 0 0倍鸡胚感染剂量 (EID)的HA基因同源病毒对所有鸡进行攻毒 .其间每周检测抗体水平变化 ,6周后以棉拭子进行泄殖腔病毒分离 .结果为攻毒后免疫组鸡HI效价为 9log2～ 1 0log2 ,对照组为 2log2～ 4log2 ;免疫组病毒分离数为 0 / 1 0 ,对照组为 1 0 / 1 0 .

摘要：目的　设计新型HIV复合多表位dna疫苗 ,探讨其在小鼠体内的免疫应答。方法以HIV抗原表位为基础进行新型HIV多表位dna疫苗的抗原分子设计 ,利用化学合成的方法合成全新HIV抗原基因 ,并构建核酸疫苗重组质粒 ,免疫BALB c小鼠 ,利用合成的表位肽进行抗体水平、特异性淋巴细胞增殖实验、特异性CTL检测分析及迟发性超敏反应。同时 ,还对所设计的HIV复合多表位dna疫苗与编码HIV全结构蛋白的dna疫苗 (pVAXI gag gp12 0 )进行特异性CTL反应的比较研究。结果　所设计的新型HIV多表位dna疫苗可在BALB c小鼠体内诱导出针对所选表位的强表位特异性的CTL反应和抗体反应。而HIV复合多表位dna疫苗与编码HIV全结构蛋白的dna疫苗相比可诱导产生更强、更广泛的表位特异性的CTL应答。结论　所设计的HIV复合多表位dna疫苗对BALB

摘要：分析了将裹着dna疫苗的微弹射入表皮细胞技术的现状 ,提出了基于两阶段引射器加速微弹的方法 ,进行了数值模拟 ,得到了不同工况下第二级喷嘴的马赫数等值线、出口截面上的静压、轴线上的速度以及在负压孔产生的负压等分布。在此基础上 ,进行了实验研究 ,测得了外流场的压力、微弹速度和负压孔的负压值。同时 ,还观察了钨微弹的实际分布 ,并以钨粉为微弹射击鸡皮。结果表明 ,模拟数据与测量结果一致性好 ,数值模拟可以指导仪器设计和实际操作 ;微弹分布均匀 ,能射入表皮细胞 ,还可穿透表皮 。

摘要：本文设计合成了氟化超支化聚酰胺-胺并研究其作为流感dna疫苗递送载体的能力。首先采用迈克尔加成反应合成超支化聚酰胺-胺聚合物[hyperbranched poly(amido amine)s,HP],并进行氟化修饰(fluorinated HP,F-HP)通过设计特异性引物扩增目的基因,构建流感病毒PR8的核蛋白(nucleoprotein,NP)基因真核表达质粒,作为dna疫苗,F-HP与NP质粒通过静电作用形成纳米复合物(F-HP/NP)。结果表明:所合成的HP的分子质量为59.7 kDa多分散系数(polydispersity index,PDI)为2.67,F-HP中氟元素的含量为20%(质量比,w/w),聚合物能与NP质粒络合形成球形的纳米粒。聚合物与dna质量比为5~10时,纳米复合物的粒径分布在100 nm左右,并随质量比的升高而减小。氟化修饰有利于提高纳米复合物的细胞摄取及溶酶体逃逸能力,进一步提高NP的细胞内表达水平。体内免疫实验表明,与HP/NP纳米复合物相比,氟化修饰的F-HP/NP纳米复合物对CD8^+T细胞具有更强的免疫应答诱导效应。以上结果说明氟化修饰的超支化聚酰胺-胺作为dna疫苗载体具有可行性。动物实验经扬州大学大学实验动物伦理委员会批准。

摘要：为研制新型有效的HBV治疗性疫苗,构建了含PreS1与S融合基因的HBV dna疫苗,即pVRC-HBSS1(PreS121–47 aa融合在S抗原1–223 aa的羧基端),并制备了CHO表达相同结构的蛋白颗粒亚单位疫苗HBSS1。在Balb/C小鼠中采用不同的dna免疫方式(即肌肉注射、皮内注射加电转)初免3次,蛋白颗粒亚单位疫苗(不同佐剂)肌肉注射加强免疫1次,然后我们分析比较了各组疫苗所引起的免疫应答特点。抗体检测结果表明:皮内注射结合电转初免组产生的PreS1与S特异性抗体水平皆高于肌肉直接注射组。进一步还发现dna疫苗与蛋白颗粒亚单位疫苗两种疫苗联合应用后S抗原特异的细胞免疫应答(IFN-γELISpot分析)明显高于dna疫苗或蛋白颗粒亚单位单独应用,其中皮内注射+电转结合蛋白颗粒亚单位疫苗联合免疫组可产生最强的细胞免疫应答。这些研究为新型HBV治疗性疫苗的优化设计与合理应用提供了依据。

摘要：HAART对HIV/AIDS的治疗起到了重要的作用,但研制有效的疫苗是解决该全球性问题的最终方案.将人工设计的HIV-1多表位-p24dna疫苗质粒pVAX1-MEGp24大量制备并纯化后,于0,4,8及18周肌肉注射免疫恒河猴,分别在第3次免疫和第4次免疫后2周(第10与第20周)采集血液,分离血清和外周血淋巴细胞(PBMC),乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测PBMC特异性CTL杀伤活性,ELISA法检测血清HIV-1抗体和PBMC培养上清Th1类细胞因子的含量,MTT法测定PBMC的增殖能力.结果表明,HIV-1多表位-p24dna疫苗免疫组的恒河猴PBMC在恒河猴限制性HIV-1CTL表位肽刺激下产生针对HIV-1靶细胞的特异性杀伤活性,分泌Th1类细胞因子IFN-γ和IL-2的水平升高,并出现HIV-1特异性细胞增殖反应;该重组疫苗同时能诱导恒河猴产生HIV-1特异性抗体.结果提示,HIV-1多表位-p24dna疫苗能诱导恒河猴产生HIV-1特异性细胞和体液免疫应答.

摘要：以O型、A型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1全基因和AsiaI型FMDV两个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因作为主要免疫原基因,以来源于非结构蛋白3ABC和结构蛋白VP4上的3个Th2细胞表位基因作为辅助基因,构建了O型、A型和Asia1型FMDV复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT,在此基础上,以金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)为基因佐剂,通过分子设计构建了SEA与OAAT融合表达基因。将构建好的表达盒OAAT与SEA融合表达基因克隆至真核表达载体PVAX1PCMV启动子下游,构建了口蹄疫三价基因佐剂dna疫苗pEA。经Western blotting和IFA检测,目的蛋白在Hela细胞中获得正确表达。小鼠免疫实验表明,pA和pEA免疫组的血清抗体均能分别与O型、A型和AsiaI抗原反应,与对照组相比差异较显著,且pEA免疫组和灭活疫苗免疫组抗体水平均显著高于pA免疫组;同时pA和pEA免疫小鼠细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10较对照组显著提高,且pEA免疫组的IL-2、IFN-γ和IL-4水平明显高于pA免疫组。用O/NY00和Asia1/YNBS/58株FMDV进行豚鼠攻毒免疫保护试验,结果表明O型和Asia1型FMDV二联灭活疫苗免疫组均获得完全保护,pA免疫组均获得2/4保护,pEA免疫组均获得3/4保护,而pVAX1和PBS免疫组完全没有保护。实验结果表明,SEA与OAAT融合表达蛋白具有较好免疫原性,且SEA可以作为dna疫苗的有效基因佐剂。

摘要：目的： 为增强猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ 的免疫保护作用而构建一表达猪白细胞介素４（ Ｉ Ｌ４）与 ｃ Ｃ１ 抗原融合蛋白的 Ｄ Ｎ Ａ 疫苗载体。方法： 通过聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ），分别扩增猪 Ｉ Ｌ４ｃ Ｄ Ｎ Ａ 和ｃ Ｃ１ｃ Ｄ Ｎ Ａ 片段并进行融合，获得的嵌合基因 Ｉ Ｌ４ｃ Ｃ１ 中含有１０ 个氨基酸的中间接头序列，同时对其５’ Ａ Ｕ Ｇ 侧翼序列进行翻译优化突变。结果：经酶切鉴定，证实有一１．５ ｋｂ 的片段插入载体，其 Ｄ Ｎ Ａ 序列分析结果与文献报道和实验设计完全一致。结论：表达猪 Ｉ Ｌ４ 与猪囊尾蚴抗原ｃ Ｃ１ 融合蛋白的 Ｄ Ｎ Ａ 疫苗载体构建成功。

摘要：根据GenBank中发表的新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因序列,设计一对引物,通过RTPCR扩增出鹅源新城疫病毒分离株JS5F基因,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,获得重组真核表达质粒pVAX1F。将pVAX1F转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成携带dna疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pVAX1F)。重组菌以不同剂量口服免疫1日龄雏鸡,结果表明,细菌对雏鸡具有良好的安全性,且不影响鸡的增重。将SL7207(pVAX1F)分别以108CFU和109CFU的剂量3次口服免疫1日龄商品代伊莎褐蛋鸡,抗体检测结果显示,在三免后1周,SL7207(pVAX1F)109CFU剂量组的血清抗体效价与空载体组之间存在显著性差异(p<0.05)。重组菌两个剂量组在首免后2周开始出现粘膜抗体,并于二免后2周和3周达到较高水平。免疫保护试验结果显示,SL7207(pVAX1F)109CFU剂量组的保护率为77.27%,与空载体组之间存在显著性差异(p<0.05)。

摘要：目的:构建含有靶向乙肝表面抗原(HBsAg)基因的siRNA、乙肝复合多表位抗原基因和hIL-12共质粒表达的新型dna疫苗,并在HepG2细胞中检测siRNA的效果以及各基因的表达。方法:设计并合成复合多表位HBV抗原基因,将其与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因融合克隆进真核表达载体pVAX1的多克隆位点中,同时将带CMV启动子的完整hIL-12表达单元克隆进载体的BspHI位点之间,再设计并合成乙肝siRNA表达单元,将其克隆进载体的MluI位点之间,得到真核三元共表达重组质粒pVAX1-siHB-HB-EGFP-hIL12。以该重组质粒瞬时转染人肝癌细胞系HepG2,通过EGFP的荧光标记观察多表位抗原的表达,以ELISA测定培养细胞上清中hIL-12的表达,以rtPCR检测siRNA对HBsAg基因的沉默效果。结果:经酶切鉴定和测序证实共表达siRNA、hIL-12的HBV多表位dna疫苗构建成功。转染细胞中检测到绿色荧光,证实抗原表达;转染后48hhIL-12的检出量为1289pg/ml细胞上清,72h检出量为1712pg/ml细胞上清;转染后HBsAg表达量明显降低,证实siRNA效果良好。结论:成功构建乙肝复合多表位抗原基因与siRNA、hIL-12共质粒表达的dna疫苗,并能在真核细胞中有效表达抗原与hIL-12基因,而且siRNA对HBsAg显示出明显的沉默效果,为进一步研究该复合型dna疫苗抗HBV的治疗效果打下基础。