摘要：目的建立结合PCR-焦磷酸测序检测单核细胞增生李斯特氏菌的方法。方法根据单核细胞增生李斯特氏菌的hly基因设计扩增引物和测序引物,特异地扩增目的片段,再制备单链模板,在测序引物引导下进行焦磷酸测序,通过测序结果与GenBank中的hly基因序列的比对进行鉴定。结果扩增引物和测序引物表现出良好的特异性,16株单核细胞增生李斯特氏菌菌株均扩增出大小249 bp的dna片段,焦磷酸测序结果与hly基因序列100%匹配,而阴性对照菌株均未扩增出dna条带,焦磷酸测序结果为阴性。结论建立的方法特异性高,是快速从dna序列水平上检测单核细胞增生李斯特氏菌的有效手段。

摘要：[目的]研究从dna碱基序列水平检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的方法。[方法]根据金黄色葡萄球菌凝固酶基因设计扩增引物和测序引物,先用PCR特异性地扩增目的片段,再制备单链模板,在测序引物引导下用焦磷酸测序法检测dna碱基序列,检测的dna碱基序列为GCCTGTGGGTACT-TCTCCTGCCAGTATAAT,则判断为金黄色葡萄球菌。[结果]20株金黄色葡萄球菌均扩增出大小215bp的dna片段,而其他对照菌株未扩增出dna条带。焦磷酸测序结果,20株金黄色葡萄球菌均测出与预期相符的dna碱基序列,而其他对照菌株未测出dna碱基序列。[结论]建立的方法特异性高,整个试验可在21-27h完成,是快速检测金黄色葡萄球菌的有效手段,可用于食品中金黄色葡萄球菌的检测。