摘要：本研究以ITS2基因为分子标记设计杂交探针,制作dna芯片鉴定杂鳞库蚊复合组、白纹伊蚊亚组和尖音库蚊复合组中的8种/亚种蚊虫。结果表明,以ITS2基因为分子标记设计的dna芯片可用于3个复合组(亚组)组间蚊虫以及杂鳞库蚊复合组的组内蚊虫鉴定,且白纹伊蚊亚组探针、尖音库蚊复合组探针、杂鳞库蚊复合组探针、三带喙库蚊探针、伪杂鳞库蚊探针、致倦库蚊探针、尖音库蚊探针具有良好的专一性和特异性。现场测试表明,该dna芯片可应用于识别不同发育阶段和不同地区的同种蚊虫,但对尖音库蚊和致倦库蚊表现出非专一性杂合。

摘要：目的　建立dna芯片检测乙型肝炎病毒 (hepatitisBvirus,HBV)基因多态性的研究方法并对实验条件进行优化。方法　设计多条寡核苷酸探针 ,在硅烷化芯片的特定位置上 ,用点样仪将探针固定 ,并与PCR扩增的HBV基因相应区段杂交 ,杂交结果影印至硝酸纤维素膜 ,经BCIP NBT避光显色 ,用放大镜观察杂交信号呈暗紫色圆点 ,根据特定位置上杂交信号的有无和与之相应的探针序列来判定基因突变的类型。结果　通过 1次杂交反应可检测HBV前C C区 (nt 1896 1814 )、BCP区 (nt1762 1764)和P区 (nt 52 8 552 )等多个位点的变异 ,与测序分析结果完全一致 ,具有较好的检测灵敏度和重复性。结论　dna芯片检测HBV基因常见突变位点多态性 ,操作简便易行 ,技术要求不高 ,具有临床推广应用价值 ,而且可以方便地通过向寡核苷酸探针阵列中添加相应探针 ,扩大基因芯片的检测应用范围 。

摘要：目的　开发快速检测耐利福平结核分枝杆菌 (结核菌 )rpoB基因突变的dna芯片。方法　根据结核菌rpoB基因序列设计探针并制作基因芯片 ,从临床样品中分离出结核菌的基因组dna ,PCR扩增含有rpoB基因突变位点的特异dna片段 ,荧光标记后与芯片上含有的检测特异突变位点的寡核苷酸探针进行杂交 ,同时与dna直接测序法测定序列比较。结果　 35株耐利福平结核菌中有 91 4 % (32 / 35 )用直接测序法检测出存在rpoB基因突变 ,dna芯片的检测效率为 71 4 % (2 5 / 35 )。结论　用dna芯片检测结核菌对利福平的耐药性具有较高的特异性和敏感性 ,可用于临床结核菌耐药性检测。

摘要：目的研制一种dna芯片,结合多重PCR方法快速检测泌尿生殖道炎症3种病原体及其耐药类型。方法根据泌尿生殖道病原体淋球菌、沙眼衣原体和解脲脲原体的基因保守序列设计引物和探针,分别检测3种病原体;根据淋球菌gyrA、parC和16srRNA基因序列突变位点设计引物和探针,分别检测淋球菌对喹诺酮类药物和大观霉素的耐药性;根据淋球菌和解脲脲原体的共同tetM基因序列设计引物和探针,检测对四环素的耐药性。制备芯片,对152份泌尿生殖道拭子提取dna进行7重PCR扩增,并且Cy5荧光标记包含上述基因序列的目的dna片段,与固定在芯片上的探针杂交,芯片信号分析系统Scanarray4000在635nm处扫描并分析结果,并与临床检查结果比较。结果dna芯片敏感性是0.01fg质粒dna。152份泌尿生殖道炎症拭子其病原体种类及其耐药类型全部可用dna芯片检测出来,与目前临床检查结果有较好的一致性(K>0.8)。结论研制的dna芯片结合7重PCR方法快速检测泌尿生殖道淋球菌、沙眼衣原体和解脲脲原体3种病原体及其对喹诺酮类药物、大观霉素和四环素的耐药类型,具有快速、高特异性和高灵敏度,可以应用于临床检测。

摘要：目的建立和优化基于全基因组dna芯片的细菌基因表达谱技术,并用实时定量RT-PCR对此技术平台进行评价。方法提取并纯化鼠疫耶尔森菌总RNA,以六核苷酸随机引物(N6)和/或基因组特异引物(GDP)逆转录合成cdna,用CY染料直接或间接标记后,与包括鼠疫耶尔森菌4005个ORF的全基因组芯片杂交,通过芯片扫描仪获得表达谱分析结果,归一化后进行分析。结果用实时定量PCR技术验证。结果采用N6+GDP混合引物以间接法标记获得了较为理想的结果,表达谱技术与实时定量PCR技术所得结果高度相关,证明了此技术的可靠性和实验设计与数据分析的合理性。结论合理的设计和归一化的分析方法是基于dna芯片的细菌基因表达谱分析成功的关键,该技术的建立为细菌功能基因组研究奠定了基础。

摘要：目的研制一种新型dna芯片,用于快速检测淋球菌gyrA基因突变。方法根据淋球菌gyrA基因的序列信息设计探针并制作dna芯片,PCR扩增并荧光标记包含gyrA基因突变的目的dna片段,与芯片杂交,同时以测序法为对照。结果50份泌尿生殖道拭子全部可用dna芯片检测出来,芯片检测结果与药敏结果符合率为100%,与测序结果二者符合率为98%。结论dna芯片检测淋球菌gyrA基因突变具有快速、高特异性和高灵敏度,可以应用于临床耐药性检测。

摘要：目的开发快速检测耐利福平与异烟肼结核分枝杆菌rpoB、katGi、nhA基因突变的dna芯片。方法根据结核分枝杆菌rpoB、katGi、nhA基因序列设计探针并制作基因芯片,从临床样品中分离出结核分枝杆菌的基因组dna,PCR扩增含有上述几个基因突变位点的特异dna片段,并事先在PCR引物的5′端作生物素标记,然后与膜条芯片上的检测特异突变位点的寡核苷酸探针进行杂交,通过生物素-链霉亲和素-过氧化物酶体系显色,直接观察突变情况,以此来判断耐药结果。结果35个利福平和异烟肼单耐药或多药耐药的结核分枝杆菌中有82.9%用芯片法检出的结果与药敏培养法一致;其中利福平耐药样品突变检出率为100.0%;有20.0%异烟肼耐药的样品芯片未检出突变,可能是突变发生在芯片检测位点范围之外。结论用dna芯片检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,具有较高的特异性和敏感性,可用于临床结核分枝杆菌耐药性检测。

摘要：【目的】研制副溶血性弧菌全基因组芯片,建立芯片杂交方法,并对芯片质量进行评价。【方法】利用副溶血性弧菌全基因组序列,挑选出4770条基因,PCR扩增各基因并将PCR产物纯化,点样制备芯片;设计了两个质控杂交组合,采用双色荧光杂交策略,对芯片质量进行评价;PCR方法验证部分芯片结果。【结果】芯片杂交与理论预期结果以及PCR验证结果完全一致。【结论】成功的研制了一批质量良好的副溶血性弧菌全基因组dna芯片,并建立了基于dna芯片的副溶血性弧菌比较基因组学技术平台,建立了一套系统的芯片数据分析的标准方法。

摘要：目的利用dna芯片快速检测结核分枝杆菌耐乙胺丁醇embB基因突变。方法根据结核分枝杆菌embB基因序列设计探针并制作dna芯片,根据结核从分枝杆菌embB基因突变的热点片段设计引物,该片段用TAMRA荧光标记PCR扩增增后与dna芯片杂交,同时以PCR—SSCP和dna测序法为对照。结果120株结核分枝杆菌临床分离株中,35株敏感株dna芯片杂交结果与标准株完全相同；85株耐乙胺丁醇临床分离株中有50株检测到embB基因突变[58．8％(50／85)],均为306位密码子突变,该突变与PCR-SSCP和测序结果完全一致；85株耐药株中后有35株未检测到突变,占41．2％(35／85)。结论用dna芯片可快速、特异地检测出大多数结核分枝杆菌耐乙胺丁醇分离株的embB基因突变,可协助临床医生制定合理的治疗方案,特别是复治患者,可帮助选择有效药物。

摘要：目的常用生药柴胡正品为柴胡属植物柴胡及狭叶柴胡的干燥根。当前,同属多种植物也做柴胡内转录间隔区使用。仅凭生药性状及显微特征难以进行真伪鉴别。在本实验中,笔者针对6种不同柴胡属植物来源的柴胡生药,基于其内转录间隔区(ITS1)区多态性研制了用于其鉴别的dna芯片。方法将设计的特异性寡核苷酸探针点印于基质上制备芯片;从待检测样品中提取基因组dna,扩增ITS1片段,并以荧光标记后,与芯片杂交。结果在与其相应的探针位置即可出现信号;每种不同来源的柴胡有其特异的杂交谱图。结论研制的dna芯片可为柴胡类生药的鉴定提供可靠便利的途径。